[发明专利]作为荧光参考标准品的DDAO化合物

说明书

本申请是申请日为2011年12月28日、申请号为201180066331.X、发明名称为“作为荧光参考标准品的DDAO化合物”的发明专利申请的分案申请。

背景

在许多不同的测定中，参比染料可以是有益的。参比染料可以用于校准、归一化，和用于确保测定正被正确地进行。在可以包含多种染料来确定多个目标的多重反应中，可能难以找到发出与其他染料不同的波长且不会干扰反应的稳定的参比染料。

概述

在一些实施方案中，提供了一种方法，其中该方法可以包括(a)形成包括至少一种探针和参比染料的混合物，其中至少一种探针中的每种包括目标特异性部分和报告染料，其中每个目标特异性部分对不同的目标是特异性的，且每种报告染料与其他报告染料不同，且其中参比染料具有式(I)：

其中：

R₁至R₃和R₆至R₈中的每个独立地是-H、卤素、-CO₂H、-CO₂R、-SO₃H、-SO₃R、-CH₂CO₂H、-CH₂CO₂R、-CH₂SO₃H、-CH₂SO₃R、-CH₂NH₂、-CH₂NHR、-NO₂、C₁-C₆烷基、取代的C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、和取代的C₁-C₆烷氧基，其中R是C₁-C₆烷基、取代的C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、和取代的C₁-C₆烷氧基；

单独使用的R₄和R₅选自C₁-C₆烷基和C₁-C₆取代的烷基，或合在一起的R₄和R₅选自C₃-C₇环烷基、C₄-C₇不饱和的环烷基、C₃-C₇取代的环烷基、或C₄-C₇取代的不饱和的环烷基；和(b)测量由参比染料发出的荧光；(c)测量由至少一种报告染料发出的荧光。在不同实施方案中，该方法可以另外包括基于由参比染料发出的经测量的荧光来调节由至少一种报告染料发出的经测量的荧光，以形成经调节的测量结果。在一些实施方案中，混合物包括至少两种、至少三种、至少四种、或至少五种探针。

在一些实施方案中，R₁选自氢、卤素、甲基和乙基；R₂和R₃各自独立地是卤素；R₄和R₅各自独立地选自甲基和乙基；R₆选自氢、卤素、甲基和乙基；R₇选自氢、卤素、甲基、乙基和SO₃H；且R₈选自氢、卤素、甲基和乙基。在一些实施方案中，R₂和R₃各自是氯，且R₇是氢或SO₃H。在一些实施方案中，参比染料选自：

在一些实施方案中，目标特异性部分可以选自寡核苷酸、肽、抗体、抗原、小分子、代谢物和多糖。在一些实施方案中，目标可以选自多核苷酸、抗原、抗体、受体、酶、细胞器、膜和细胞。在一些实施方案中，目标特异性部分可以是寡核苷酸。在一些实施方案中，探针包括寡核苷酸、报告染料和淬灭染料。在一些实施方案中，目标可以是多核苷酸。在一些实施方案中，方法可以包括放大多核苷酸的至少一部分。