[发明专利]乳粉中菌落总数标准样品及其制备方法

说明书

本发明属于微生物学检测方面的质量控制领域，特别涉及一种乳粉中菌落总数标准样品及其制备方法。乳粉中菌落总数标准样品的目标菌群由蜡样芽胞杆菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、金黄色葡萄球菌组成。本发明均匀性、稳定性符合标准样品的要求，可以最大程度保证测试样品的稳定性，即使在运输及储存中大肠埃希氏菌的含量发生变化，在统计学意义上也不会影响菌落总数；样品的制备方法，工艺简单，成功率高。

技术领域

本发明属于微生物学检测方面的质量控制领域，特别涉及一种乳粉中菌落总数标准样品及其制备方法。

背景技术

乳粉微生物学检验领域非常特殊。目前，国内外尚未有机构制备乳粉微生物学标准样品和大规模生产的先例，仍属空白领域。目前虽有一些机构制备微生物类的标准样品，但标准样品的均匀性和稳定性几乎不能满足要求，运输极为困难；或标准样品为仅含有目标菌的纯菌株，与实际样品差距较大，不能满足日常实验室质量控制等需要。

菌落总数就是指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每克(每毫升)检样所生长出来的微生物菌落总数。如果制备的菌落总数样品中，菌群易发生变化(繁殖和死亡等)，就会导致样品的保存期短，样品的均匀性和稳定性差。因此，综合考虑细菌的生化特性，选取性质相对稳定的菌群对保证样品的均匀性和稳定性十分重要。菌落总数样品制备的工艺技术要求比较高，并且样品的均匀性和稳定性与冻干的菌种、冻干的工艺条件、冻干保护剂的使用、再水化的介质等均有密切的关系。

乳粉中菌落总数反映了乳粉在生产过程中的卫生情况，体现乳粉被细菌污染的程度，是做出科学卫生评价的重要指标之一，如菌落总数严重超标预示着存在肠道传染病或食物中毒的潜在危险。因此，制备均匀性与稳定性俱佳的菌落总数标准样品，可以避免菌落总数检验的随意性和不确定性，有效地保证检测结果的准确可信。这对提高实验室质量控制水平，保障食品安全，甚至于打破国际贸易壁垒、提高我国食品国际竞争力都具有特殊重要的意义。

发明内容

本发明的目的是克服菌落总数标准样品中总的活的细菌数目在运输、储存和测试等过程中菌落数都可发生变化的问题，提供一种乳粉中菌落总数标准样品，均匀性、稳定性符合标准样品要求，本发明的另一个目的是提供该标准样品的制备方法，工艺简单，成功率高。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：乳粉中菌落总数标准样品，其特征是：目标菌群由蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)、大肠埃希氏菌(E.coil)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pnenmoniae)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)组成。

所述样品以海藻糖、脱脂奶粉和无菌水为基质，其中海藻糖的体积分数为12％、脱脂奶粉的体积分数为15％。

所述样品中目标菌群的目标浓度为10⁴～10⁵CFU/mL。

乳粉中菌落总数标准样品的制备方法，其特征是：包括样品添加菌株的选择、冻干保护剂的配制、样品冻干、样品的均匀性和稳定性试验四个步骤，其中样品冻干过程为：菌株复苏传代—增菌—菌悬液配制—冻干和包装—储存，具体过程为：

(1)菌株复苏传代

将标准菌株接种到营养琼脂斜面培养基中，在36±1℃下使其复苏和生长，并对复苏的菌株进行鉴定；

(2)增菌

目标菌群培养至对数生长期末，从斜面刮取菌落，加到10mL的冻干保护剂中制成相应单一菌种的菌液；

(3)菌悬液配制