[发明专利]一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的采样方法及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物病原分子诊断技术领域，具体涉及到一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的采样方法及检测方法。

背景技术

猪的垂直传播疾病是指母猪所患有的某种疾病其病原体可经卵巢、胎盘直接传播给仔猪，几乎所有的垂直传播病原均可以水平传播，引发仔猪大范围和长时间的感染，造成仔猪生长发育受到抑制，甚至死亡，给养猪业造成困扰和巨大的经济损失。新生仔猪感染的常见垂直传播病原有猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、流行性腹泻病毒(PED)、猪传染性胃肠炎病毒(TGE)、猪支原体、猪衣原体和弓形虫。

控制垂直传播疾病得关键在于预防，因此对新生仔猪常见垂直传播病原的检疫与监测至关重要。样品采集是检测的重要环节之一，关系到检测的准确性与检测效率。

发明内容

本发明为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的采样方法及检测方法，本发明的新生仔猪的采样方法及检测方法，采样部位为胎衣、脐带血、扁桃体、血液、鼻拭子、喉拭子和肛拭子，通过对上述采样部位的PCR检测，可判断仔猪是否感染常见垂直传播病原，本发明简单方便、针对性强，通过对新生仔猪的常见垂直传播病原的检测，有利于猪群疾病预防和净化。

本发明提供的一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的采样方法，包括通过胎衣、脐带血、扁桃体、血液、鼻拭子、喉拭子和肛拭子对垂直传播病原的采样。

上述的采样方法，其中，所述通过胎衣采样的步骤包括：用无菌剪刀在不同部位剪5块1-2cm2大小面积的胎衣，置于无菌离心管中；所述通过脐带血采样的步骤包括：取仔猪脐带，在中段剪开，将脐带血挤入无菌干燥的青霉素瓶中，3～5滴，作为待检样品；所述通过扁桃体采样的步骤包括：利用扁桃体采样器进行采集，具体为首先固定活猪的上唇，用开口器打开口腔，用采样枪采取扁桃体样品，用灭菌牙签挑至无菌离心管中并作标记；所述通过血液采样的步骤包括：将猪面朝上固定，全身成一直线，前肢上抬，在两侧第一对肋骨与胸骨结合处的前方会出现左右两个明显的凹陷窝，将皮肤消毒，将注射器向右侧凹陷窝处由上而下，稍偏向中央及胸腔方向刺入，见有回血，即可采血，将血液以3000r/min离心10分钟，取血清作为待检样品。

上述的采样方法，其中，所述通过鼻拭子采样的步骤包括：将无菌拭子用无菌生理盐水湿润后，插入仔猪鼻腔中，沿鼻腔壁轻轻转动3～5圈，投入无菌离心管中，折断拭杆，使其完全置于管中，盖紧管盖；所述通过喉拭子采样的步骤包括：将无菌拭子用无菌生理盐水湿润后，插入仔猪咽部，转动3～5圈，投入无菌离心管中，折断拭杆，使其完全置于管中，盖紧管盖；所述通过肛拭子采样的步骤包括：将无菌拭子用无菌生理盐水湿润后，插入仔猪肛门，转动3～5圈，投入无菌离心管中，折断拭杆，使其完全置于管中，盖紧管盖。

上述的采样方法，其中，所述扁桃体采样方法可用于检测猪瘟病毒；所述脐带血采样方法可用于检测猪细小病毒或猪圆环病毒2型或弓形虫；所述血液采样方法可用于检测猪圆环病毒2型或猪繁殖与呼吸综合征病毒；所述鼻拭子、喉拭子采样方法可用于检测猪伪狂犬病毒或猪支原体病毒或猪衣原体；所述胎衣采样方法可用于检测日本乙型脑炎病毒或猪细小病毒；所述肛拭子采样方法可用于检测猪传染性胃肠炎病毒或流行性腹泻病毒。

本发明还提供了一种检测新生仔猪常见垂直传播病原的检测方法，包括猪瘟病毒的检测、猪细小病毒的检测、猪圆环病毒2型的检测、猪伪狂犬病毒的检测、猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测、日本乙型脑炎病毒的检测、流行性腹泻病毒的检测、猪传染性胃肠炎病毒的检测、猪支原体的检测、猪衣原体的检测、弓形虫的检测。

上述的检测方法，其中，所述猪瘟病毒的检测方法包括：取采集的扁桃体，剪碎匀浆，取匀浆液提取病毒RNA，并反转录为cDNA，进行PCR扩增，扩增引物为：

F 5'-AAACGGAGGGACTAGCCAT-3'

R 5'-TGCCATACAGCAGAGA-3'

目的条带为252bp，扩增程序为：95℃5min，95℃30s，55℃30s，72℃30s，35个循环，72℃10min。

上述的检测方法，其中，所述猪细小病毒的检测方法包括：取采集的脐带血和胎衣，提取病毒DNA，进行PCR扩增，扩增引物为：

F 5'-ATACAATTCTATTTCATGGGCCAGC-3'