[发明专利]一种基于修饰纳米金的过氧化氢及过氧化物酶检测方法

权利要求书

1.一种基于修饰纳米金的过氧化氢及过氧化物酶检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)、纳米金的修饰：

在纳米金溶液中按照摩尔比为10：1～200：1的比例加入对巯基苯酚或对巯基苯胺溶液对纳米金进行修饰，混匀并包被锡箔后暗处放置1～3小时，获得修饰纳米金颗粒溶胶；

(2)、建立过氧化氢检测及过氧化物酶检测的标准曲线

以已知浓度的过氧化氢溶液为标准品，修饰纳米金颗粒溶胶为检测物，加入氯化钠溶液，检测含已知浓度的过氧化氢的修饰纳米金颗粒溶胶在720nm和520nm处的光密度，得到过氧化氢的标准曲线；

以已知酶活的呈梯度分布的若干过氧化物酶溶液为标准品，修饰纳米金颗粒溶胶为检测物，加入氯化钠溶液，检测含已知浓度的过氧化氢的修饰纳米金颗粒溶胶在720nm和520nm处的光密度，得到过氧化物酶的标准曲线；

(3)、待测样品的检测

以实际过氧化氢样品为被检测物，修饰金纳米颗粒溶胶为检测物，加入氯化钠溶液，检测含实际过氧化氢样品的修饰金纳米颗粒溶胶在720nm和520nm处的光密度，将光密度的比值与步骤(2)中的标准曲线进行比较，得出实际过氧化氢样品的浓度；

以实际含过氧化物酶样品为被检测物，修饰金纳米颗粒溶胶为检测物，加入氯化钠溶液，检测含实际过氧化物酶样品的修饰金纳米颗粒溶胶在720nm和520nm处的光密度，将光密度的比值与标准曲线进行比较，得出实际过氧化物酶样品的酶活浓度。

2.根据权利要求1所述的过氧化氢及过氧化物酶检测方法，其特征在于：步骤(2)中建立过氧化氢检测标准曲线的方法如下：以已知浓度的过氧化氢溶液为标准品，修饰纳米金颗粒溶胶为检测物，在过氧化物酶存在的条件下进行反应，然后加入氯化钠溶液至反应产物的终浓度为10～100mM，修饰纳米金颗粒溶胶发生聚集，检测含已知浓度的过氧化氢的修饰纳米金颗粒溶胶在720nm和520nm处的光密度，以720nm和520nm处光密度的比值为纵坐标，以10为底过氧化氢浓度的对数为横坐标绘图，得到过氧化氢的标准曲线。

3.根据权利要求2所述的过氧化氢及过氧化物酶检测方法，其特征在于：步骤(3)中待测过氧化氢样品的浓度检测方法如下：以实际过氧化氢样品为被检测物，修饰金纳米颗粒溶胶为检测物，在过氧化物酶存在的条件下，反应数分钟至半小时，加入氯化钠溶液至终浓度为10-100mM，修饰金纳米颗粒发生聚集，检测含实际过氧化氢样品的修饰金纳米颗粒溶胶在720nm和520nm处的光密度，将720nm和520nm光密度的比值与标准曲线进行比较，得出实际过氧化氢样品的浓度。

4.根据权利要求1所述的过氧化氢及过氧化物酶检测方法，其特征在于：步骤(2)中建立过氧化物酶检测标准曲线的方法如下：以已知酶活的呈梯度分布的过氧化物酶溶液为标准品，修饰纳米金颗粒溶胶为检测物，在过量过氧化物酶存在的条件下进行反应，再加入10～100mM的氯化钠溶液，修饰纳米金颗粒溶胶发生聚集，检测含已知浓度的过氧化氢的修饰纳米金颗粒溶胶在720nm和520nm处的光密度，以720nm和520nm处光密度的比值为纵坐标，以10为底过氧化物酶单位浓度的对数为横坐标绘图，得到过氧化物酶的标准曲线。

5.根据权利要求4所述的过氧化氢及过氧化物酶检测方法，其特征在于：步骤(3)中待测过氧化物酶样品的浓度检测方法如下：以实际含过氧化物酶样品为被检测物，修饰金纳米颗粒溶胶为检测物，在过量过氧化氢存在的条件下，反应数分钟至半小时，加入10～100mM的氯化钠溶液，修饰金纳米颗粒发生聚集，检测含实际过氧化物酶样品的修饰金纳米颗粒溶胶在720nm和520nm处的光密度，将720nm和520nm光密度的比值与标准曲线进行比较，得出实际过氧化物酶样品的酶活浓度。