[发明专利]富含小肽的苜蓿蛋白粉制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物发酵的方法，尤其是涉及一种富含小肽的苜蓿蛋白粉制备方法。

背景技术

植物活性肽的制备途径有两种：一是提取植物本身所固有各种天然活性物质；二是通过特有的方法从植物蛋白中提取植物活性肽。但是，植物中固有的天然活性物质很少，分离复杂，所以，一般都是从植物蛋白中分离植物活性肽。常见的从植物蛋白中分离植物活性肽的方法有酶解法、微生物发酵法、酸碱水解法等。酶解法是最常用的一种制备植物活性肽的方法，酶解法生产的植物活性肽安全性高，条件温和，易控制，已经成为制备植物活性肽的主要方法。但酶解法生产苜蓿肽的缺点是使用酶的成本较高，同时对酶的筛选过程较复杂，不易获得高产酶。而微生物发酵法是一种新的制备植物活性肽的方法，该方法主要是利用能产蛋白酶的菌株对植物蛋白进行酶解得到植物活性肽。微生物发酵法制备植物活性肽的菌种来源丰富，酶产量较高，成本低廉，操作简便。但同样存在诸如菌种退化、菌株的生物安全性等缺点。而酸碱水解法是将酸或碱加入到含蛋白的水溶液中使其水解，离心得到植物活性肽。虽然该方法价格低廉，操作简便，但是该方法中存在很大的弊端，酸水解会使L-型氨基酸受损，产生有毒物质；碱水解的产物有移位，水解过程很难控制。

为了解决以上存在的问题，人们一直在寻求一种理想的技术解决方案。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种富含小肽的苜蓿蛋白粉制备方法，以解决上述问题。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种富含小肽的苜蓿蛋白粉制备方法，具体包括以下步骤：

菌种活化：分别提供一种白腐菌和一种啤酒酵母菌；然后分别将所述白腐菌和所述啤酒酵母菌进行活化培养，得到活化后的白腐菌和活化后的啤酒酵母菌；

发酵种子液的制备：分别对所述活化后的白腐菌和所述活化后的啤酒酵母菌进行扩繁培养，制得白腐菌扩大种子液和啤酒酵母菌扩大种子液；将所述啤酒酵母菌扩大种子液和所述白腐菌扩大种子液进行混合，制得发酵种子液；

固态发酵：将原苜蓿粉、玉米粉、糖蜜和水均匀混合，得到预混物料；向所述预混物料中加入所述发酵种子液进行发酵，制得苜蓿蛋白粗粉；

苜蓿蛋白的提取：采用碱提酸沉法从所述苜蓿蛋白粗粉中提取苜蓿蛋白，制得富含小肽的苜蓿蛋白粉；

其中，所述菌种活化步骤中，所述白腐菌为糙皮侧耳Pleurotus ostreatus，保藏编号为CGMCC No.13696，菌丝体为多核，一孢内随机分布多达15个细胞核，菌丝一般无隔膜，也无锁状联合。所述啤酒酵母菌为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，保藏编号为CGMCC No.13751，菌落为乳白色，有光泽，平坦，边缘整齐；上述菌种均于2017年03月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，具体地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

基于上述，所述菌种活化的步骤包括：首先提供两份PDA固体培养基，然后分别将所述白腐菌和所述啤酒酵母菌接种于两份所述PDA固体培养基上并在28℃下恒温培养，分别得到所述活化后的白腐菌和所述活化后的啤酒酵母菌。

基于上述，所述PDA固体培养基的制备方法包括：首先按照质量比为（8～10）：（1～3）：1的比例分别称取马铃薯、蔗糖和琼脂，将所述马铃薯洗净去皮切块并置于蒸馏水中进行蒸煮，经纱布过滤后得到活化马铃薯泥，然后将所述蔗糖和所述琼脂溶解于所述活化马铃薯泥中并进行灭菌处理，制得所述PDA固体培养基。

基于上述，所述发酵种子液的制备步骤包括：首先按照质量比为（8～10）：（1～3）的比例分别称取马铃薯、蔗糖，将所述马铃薯洗净去皮切块并置于蒸馏水中进行蒸煮，经纱布过滤后得到扩大培养马铃薯泥，然后将所述蔗糖溶解于所述扩大培养马铃薯泥中并进行灭菌处理，制得两份所述PDA液体培养基；

然后将所述活化后的白腐菌接种到一份所述PDA液体培养基中，并在28 ℃、120 r/min条件下震荡培养80 h～95 h，制得所述白腐菌扩大种子液；将所述活化后的啤酒酵母菌接种于另一份所述PDA液体培养基中，并在28 ℃、120 r/min条件下震荡培养10 h～15 h，制得所述啤酒酵母菌扩大种子液；最后按照体积比为（2～3）：1的比例将所述啤酒酵母菌扩大种子液和所述白腐菌扩大种子液进行混合，制得所述发酵种子液。