[发明专利]富含小肽的苜蓿蛋白粉制备方法

权利要求书

1.一种富含小肽的苜蓿蛋白粉制备方法，具体包括以下步骤：

菌种活化：提供一种白腐菌和一种啤酒酵母菌；然后将所述白腐菌和所述啤酒酵母菌分别进行活化培养，得到活化后的白腐菌和活化后的啤酒酵母菌；

发酵种子液的制备：分别对所述活化后的白腐菌和所述活化后的啤酒酵母菌进行扩繁培养，制得白腐菌扩大种子液和啤酒酵母菌扩大种子液；将所述啤酒酵母菌扩大种子液和所述白腐菌扩大种子液进行混合，制得发酵种子液；

固态发酵：将原苜蓿粉、玉米粉、糖蜜和水均匀混合，得到预混物料；向所述预混物料中加入所述发酵种子液进行发酵，制得苜蓿蛋白粗粉；

苜蓿蛋白的提取：采用碱提酸沉法从所述苜蓿蛋白粗粉中提取苜蓿蛋白，制得富含小肽的苜蓿蛋白粉；其中，在所述菌种活化步骤中，所述白腐菌为糙皮侧耳Pleurotus ostreatus，保藏编号为CGMCC No.13696；所述啤酒酵母菌为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，保藏编号为CGMCC No.13751；两种菌种均于2017年03月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

2.根据权利要求1所述的富含小肽的苜蓿蛋白粉制备方法，其特征在于，所述菌种活化的步骤包括：首先提供两份PDA固体培养基，然后分别将所述白腐菌和所述啤酒酵母菌接种于两份所述PDA固体培养基上并在28℃下恒温培养，分别得到所述活化后的白腐菌和所述活化后的啤酒酵母菌。

3.根据权利要求2所述的富含小肽的苜蓿蛋白粉制备方法，其特征在于，所述PDA固体培养基的制备方法包括：首先按照质量比为（8～10）：（1～3）：1的比例分别称取马铃薯、蔗糖和琼脂粉，将所述马铃薯洗净去皮切块并置于蒸馏水中进行蒸煮，经纱布过滤后得到活化马铃薯泥，然后将所述蔗糖和所述琼脂粉溶解于所述活化马铃薯泥中并进行灭菌处理，制得所述PDA固体培养基。

4.根据权利要求3所述的富含小肽的苜蓿蛋白粉制备方法，其特征在于，所述发酵种子液的制备步骤包括：首先按照质量比为（8～10）：（1～3）的比例分别称取马铃薯、蔗糖，将所述马铃薯洗净去皮切块并置于蒸馏水中进行蒸煮，经纱布过滤后得到扩大培养马铃薯泥，然后将所述蔗糖溶解于所述扩大培养马铃薯泥中并进行灭菌处理，制得两份PDA液体培养基；

然后将所述活化后的白腐菌接种到一份所述PDA液体培养基中，并在28 ℃、120 r/min条件下震荡培养80 h～95 h，制得所述白腐菌扩大种子液；将所述活化后的啤酒酵母菌接种于另一份所述PDA液体培养基中，并在28 ℃、120 r/min条件下震荡培养10 h～15 h，制得所述啤酒酵母菌扩大种子液；最后按照体积比为（2～3）：1的比例将所述啤酒酵母菌扩大种子液和所述白腐菌扩大种子液进行混合，制得所述发酵种子液。

5.根据权利要求4所述的富含小肽的苜蓿蛋白粉制备方法，其特征在于，所述固态发酵的步骤包括：首先将苜蓿全株粉碎并经10目筛筛分处理制得所述原苜蓿粉，然后向所述原苜蓿粉中加水、所述玉米粉和所述糖蜜得到预混物料；按照占所述原苜蓿粉质量5%的接种量向所述预混物料中加入所述发酵种子液，并置于28 ℃下进行发酵100 h～130 h，制得所述苜蓿蛋白粗粉；其中，所述原苜蓿粉与水的质量比为1：（1～3），所述原苜蓿粉与所述玉米粉的质量比为100：（0.5～2），所述原苜蓿粉与所述糖蜜的质量比为100：（1～3）。

6.根据权利要求5所述的富含小肽的苜蓿蛋白粉制备方法，其特征在于，所述苜蓿蛋白的提取步骤包括：按照质量比为1：（5～10）的比例向所述苜蓿蛋白粗粉中加水并调节pH为9.0，将其放置于30 ℃～45 ℃水浴浸提处理15 min～30 min后，进行一次离心处理并将沉淀移除，得到一次上清液，调整所述一次上清液的pH为4.0进行二次离心处理，去除二次上清得到二次沉淀物，将所述二次沉淀物进行冷冻干燥处理，制得所述富含小肽的苜蓿蛋白粉。