[发明专利]脂肪酸合成酶在人重组FGF21蛋白活性检测中的应用

说明书

技术领域

本发明属于脂肪酸合成酶(FAS)应用技术领域，具体涉及一种脂肪酸合成酶在人重组FGF21蛋白活性检测中的应用。

背景技术

肥胖和2型糖尿病相关的药物研发一直是科研与开发领域的热点。在肥胖和2型糖尿病模型小鼠以及人类患者的研究发现，FGF21重组蛋白可减轻体重、降低血脂、降低血糖、显著减轻肥胖和2型糖尿病及其并发症。因此，在肥胖和2型糖尿病相关药物研发的众多候选分子中，成纤维细胞生长因子21(FGF21)是一个研发热点。

建立一个稳定高效的药物效果检测体系是评价候选药物的关键。一个客观评价FGF21重组蛋白治疗糖尿病效果的检测指标对于FGF21研发至关重要。目前，脂肪细胞的葡萄糖摄取量的测定是目前普遍采用的FGF21活性检测方法：该方法一般是测定葡萄糖的类似物2-脱氧葡萄糖，2-脱氧葡萄糖摄入细胞后被己糖激酶磷酸化为6-磷酸-2-脱氧葡萄糖，6-磷酸-2-脱氧葡萄糖无法进入后续代谢步骤，因而会在细胞中聚集，可反映细胞的葡萄糖摄入水平。该方法检测过程中一般使用放射性物质标记2-脱氧葡萄糖，这对于实验防护和环境保护要求较高；另外，检测过程中还可以使用荧光方法测定6-磷酸-2-脱氧葡萄糖的水平，该方法价格昂贵，不利于高通量筛选使用，同时葡萄糖摄取检测还受到己糖激酶活性的影响，在酶活性发生变化时不能很好地反映葡萄糖摄取能力变化。

因此，研发新的FGF21功能检测的体系不仅可弥补葡萄糖摄取测定的不足，而且能够获得给为简便可靠的检测方法，这对于客观评价人重组FGF21蛋白效果具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种脂肪酸合成酶(FAS)在人重组FGF21蛋白活性检测中的应用，为判断人重组FGF21蛋白活性提供了新的思路，解决了现有检测方法成本昂贵、对环境要求高的问题。

本发明所采用的技术方案是，脂肪酸合成酶在人重组FGF21蛋白活性检测中的应用。

本发明的特点在于，

脂肪酸合成酶的基因表达水平与人重组FGF21蛋白的添加浓度的关系为：脂肪酸合成酶基因表达水平随人重组FGF21蛋白的添加浓度的增加而减小。

脂肪酸合成酶基因表达水平通过定量PCR方法检测。

定量PCR方法检测过程中，脂肪酸合成酶的引物序列为：

上游引物：5’-TTG CCC GAG TCA GAG AAC C-3’；

下游引物：5’-T CCA CAA TAG CTT CAT AGC-3’。

本发明所采用的另一个技术方案是，用于判断人重组FGF21蛋白活性的脂肪酸合成酶，脂肪酸合成酶表达被人重组FGF21蛋白浓度下调，且呈剂量依赖性降低。

本发明的特点还在于，

脂肪酸合成酶为脂肪细胞内的脂肪酸合成酶。

本发明的有益效果是：本发明通过人重组FGF21蛋白处理脂肪细胞，采用定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测脂肪细胞的基因表达，从而确定脂肪细胞的脂肪酸合成酶(FAS)表达水平成为FGF21活性检测的新指标，操作过程简单，对环境的要求低，有很好的实用价值。

附图说明

图1是本发明细胞转变为成熟脂肪细胞的显微图片；

图2是本发明定量PCR方法中脂肪酸合成酶和beta-actin基因的扩增曲线图；

图3是本发明定量PCR方法中PCR产物的熔解曲线；

图4是本发明的人重组FGF21蛋白处理细胞12h后对脂肪酸合成酶基因表达水平的影响图；

图5是本发明人重组FGF21蛋白浓度与脂肪酸合成酶基因表达的的量效关系图；

图6是本发明人重组FGF21受体抑制剂对人重组FGF21蛋白作用的抑制效应图。

具体实施方式

本发明公开的脂肪细胞内脂肪酸合成酶在人重组FGF21蛋白活性检测中的应用，下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。

一、细胞培养和处理