[发明专利]一种用于检测染色体拷贝数变异的测序文库构建方法和试剂盒在审
| 申请号： | 201710476884.1 | 申请日： | 2017-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN107217308A | 公开（公告）日： | 2017-09-29 |
| 发明（设计）人： | 商玲;吕萌;陈祥彬;王婷婷;张建光 | 申请（专利权）人： | 北京贝瑞和康生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京市金杜律师事务所11256 | 代理人： | 孟凡宏,王月 |
| 地址： | 102299 北京市昌平区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 染色体 拷贝 变异 序文 构建 方法 试剂盒 | ||
1.一种用于检测染色体拷贝数变异的高通量测序文库的快速构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用双链DNA片段化酶将待测DNA随机片段化；
(2)对片段化后的DNA进行末端补平和3’端悬A；
(3)将末端补平并3’端悬A的DNA与测序接头连接，获得连接产物；
(4)纯化所述连接产物，获得测序文库，
其中步骤(1)-(3)在单一反应管中完成。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)-(3)之间不包含DNA纯化步骤。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，不包含PCR扩增步骤。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)和(2)之间还包括将所述双链DNA片段化酶灭活的步骤。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的双链DNA片段化酶为非特异性切口核酸酶和T7内切酶突变体的混合酶。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述非特异性切口核酸酶是Vvn核酸酶，所述T7内切酶突变体是在两个催化结构域之间的桥接区具有突变的T7内切酶。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)采用T4DNA聚合酶和Taq酶进行。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测序接头为与测序平台匹配的双链的测序接头。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)采用T4DNA连接酶进行。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测序文库适用于第二代高通量测序平台。
11.一种用于构建检测染色体拷贝数变异的测序文库的试剂盒，其特征在于，包含：用于将DNA片段化的双链DNA片段化酶和缓冲液I、用于灭活双链DNA片段化酶的缓冲液II、用于DNA末端补平的酶和用于3’端悬A的酶、测序接头、连接酶和用于连接的缓冲液III。
12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述双链DNA片段化酶为非特异性切口核酸酶和T7内切酶突变体的混合酶。
13.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述非特异性切口核酸酶是Vvn核酸酶，所述T7内切酶突变体是在两个催化结构域之间的桥接区具有突变的T7内切酶。
14.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述用于DNA末端补平的酶是T4DNA聚合酶，用于3’端悬A的酶是Taq酶。
15.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述测序接头为与测序平台匹配的双链的测序接头。
16.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述连接酶是T4DNA连接酶。
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