[发明专利]一种环境化学品对大鼠甲状腺系统影响的测定方法

权利要求书

1.一种环境化学品对大鼠甲状腺系统影响的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

(a)试验组：环境化学品经口每天暴露大鼠7-28天后，收集血液及甲状腺、肝脏样品；以未经环境化学品暴露大鼠血液及甲状腺、肝脏样品为对照组；

(b)对步骤(a)所得到血液样品进行预处理，利用酶联免疫吸附实验对血液样品中的甲状腺激素进行定量分析，计算各组数据平均值；将试验组与对照组的数据平均值进行T检验比较，若P值小于0.05且试验组数据平均值大于对照组数据平均值，说明该每天暴露量的环境化学品暴露升高了甲状腺激素水平，引起甲亢；若P值小于0.05且试验组数据平均值小于对照组数据平均值，说明该每天暴露量的环境化学品暴露降低了甲状腺激素水平，引起甲减；若不满足上述条件，说明该每天暴露量的环境化学品暴露未对甲状腺激素水平产生影响；

(c)对步骤(a)所得到的甲状腺、肝脏样品分别进行预处理，利用荧光实时定量PCR实验对甲状腺、肝脏样品中的甲状腺激素相关基因表达水平分别进行定量分析，计算各组数据平均值，将试验组与对照组的数据平均值进行T检验比较，并计算试验组数据平均值÷对照组数据平均值；若P<0.05且试验组数据平均值÷对照组数据平均值>2表明该暴露量的环境化学品显著升高了该基因表达水平；若P<0.05且试验组数据平均值÷对照组数据平均值<0.5表明该暴露量的环境化学品显著降低了该基因表达水平；若不满足上述条件，则表明该暴露量的环境化学品未对该基因表达水平产生影响。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤a中，实验材料为雄性Sprague Dawley品系大鼠(Rattus norvegicus)，控制体重为180～240g，6～10周龄，平分为4组；暴露实验进行之前在屏障系统内进行适应检查，给药期间动物单笼饲育，饲育方式为每日经口灌胃一次，连续7～28天；给药期间，动物自由摄食饮水；动物解剖前禁食过夜，不限制饮水；采用戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔注射麻醉，腹部大动脉取全血样移入5mL离心管中储存，并使用肝素钠抗凝；采血结束后对动物进行系统解剖，取出动物的甲状腺、肝脏等脏器，并剥去任何粘附的组织，-80℃低温保存。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤b中，对步骤a中获得的血样进行离心处理，4000rpm离心10～15min；利用酶联免疫吸附试验方法对其中的甲状腺素(T₄)、三碘甲腺原氨酸(T₃)、游离甲状腺素(FT₄)及游离三碘甲腺原氨酸(FT₃)含量进行定量分析；计算各组数据平均值，将试验组与对照组的数据平均值进行T检验比较；若P值小于0.05且试验组数据平均值大于对照组数据平均值，说明该每天暴露量的环境化学品暴露升高了甲状腺激素水平，引起甲亢；若P值小于0.05且试验组数据平均值小于对照组数据平均值，说明该每天暴露量的环境化学品暴露降低了甲状腺激素水平，引起甲减；若不满足上述条件，说明该每天暴露量的环境化学品暴露未对甲状腺激素水平产生影响。