[发明专利]乙型肝炎DNA疫苗的免疫佐剂

说明书

技术领域

本发明属于疫苗领域，涉及疫苗佐剂，具体涉及乙型肝炎DNA疫苗的免疫佐剂。

背景技术

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的一种影响传染病。接种乙肝疫苗是目前控制乙型肝炎感染的最有效的措施，但是传统的乙型肝炎亚单位疫苗是由乙型肝炎病毒的表面抗原和铝佐剂组成，铝佐剂疫苗仅能引起很好的体液免疫反应而不能引起有效的细胞免疫反应。

DNA疫苗又称为基因疫苗或核酸疫苗，其原理是编码基因插入到带有启动子的质粒载体，后用物理的方法将其导入到体内细胞，也即将裸露的DNA注入机体后，目的基因在体内表达出目的蛋白，从而诱发机体的免疫反应。表达的蛋白经APC加工后，通过MHCⅠ与MHCⅡ两条通道提呈给免疫系统，刺激机体产生特异性体液和细胞免疫反应。DNA疫苗具有以下优点：可以同时诱导细胞及体液免疫；不同免疫途径均可诱发免疫反应；具有适当结构及组成的外源性基因可以在人体内表达，并诱生中和性抗体；易保存、运输、生产。但它在诱导免疫应答中的效率相对较低，尤其是在大型动物和人类中，影响了它的实际应用。

佐剂是指与抗原同时或预先应用，能增强机体针对抗原的免疫应答能力，或改变免疫反应类型的物质。免疫佐剂可以增强抗体应答；增强疫苗的粘膜传递，增进免疫接触；增强细胞免疫；增强弱免疫原的免疫原性，如高度纯化的抗原或重组抗原；减少抗原接种剂量和接种次数；促进疫苗在免疫应答能力弱的人群中的免疫效果；加快免疫应答的速度和延长持续时间；改变抗原的构型；改变体液抗体的种类、IgG亚类和抗体的亲和性。

佐剂的应用对于提高DNA疫苗诱导免疫应答的效率至关重要。

发明内容

本发明旨在提供一种乙型肝炎DNA疫苗的免疫佐剂，该免疫佐剂为一种酶解多肽，以增强乙型肝炎DNA疫苗的免疫应答效率。

本发明通过如下技术方案得以实现：

一种酶解多肽，通过如下方法制备而成：将青蛤肉脏经碱性蛋白酶酶解，用超滤膜截留分子量5000-3000u的组分，冷冻干燥即得所述酶解多肽。

优选地，所述的酶解多肽通过如下方法制备而成：取青蛤肉脏匀浆破碎，置于蒸馏水中，加入碱性蛋白酶酶解，酶解条件为pH值9.4-9.8，酶解温度42-48℃，酶解时间6-8小时；酶解结束后，加热使碱性蛋白酶灭活，冷却至常温，12000-14000转/分钟离心15-25分钟，取上清，依次用截留分子量为10000u、5000u、3000u的超滤膜进行分级分离，收集截留分子量5000-3000u的组分，冷冻干燥即得所述酶解多肽。

优选地，碱性蛋白酶重量为肉脏重量0.2-0.4％。

优选地，酶解条件为pH值9.6，酶解温度45℃，酶解时间7小时。

优选地，加热使碱性蛋白酶灭活的方法为：在80-90℃条件下水浴8-12分钟。

上述酶解多肽用作乙型肝炎DNA疫苗佐剂的用途。

本发明优点：

本发明酶解多肽可显著增强乙型肝炎DNA疫苗的免疫应答效率，可用作DNA疫苗佐剂。

附图说明

图1为各组抗HBs IgG浓度；

图2-4为各组细胞因子表达检测结果。

具体实施方式

为了更好地解释本发明的技术方案，下面结合具体实施例进一步介绍。实施例中未特别强调的实验材料均为常规实验材料，属于本领域技术人员易于获得的范畴。

实施例1：酶解多肽的制备

新鲜青蛤去壳取内脏，-20℃冷冻保存备用；超滤杯和超滤膜购于上海摩速科学器材有限公司；碱性蛋白酶37017(1:2.5U/g)购于诺维信公司。

取青蛤肉脏匀浆破碎，置于蒸馏水中，加入碱性蛋白酶酶解(碱性蛋白酶添加质量为肉脏重量的0.3％)，酶解条件为pH值9.6，酶解温度45℃，酶解时间7小时；酶解结束后，85℃条件下水浴10分钟使碱性蛋白酶灭活，冷却至常温，13000转/分钟离心20分钟，取上清，依次用截留分子量为10000u、5000u、3000u的超滤膜进行分级分离，收集截留分子量5000-3000u的组分，冷冻干燥即得所述酶解多肽。

实施例2：酶解多肽的免疫增强作用

一、实验材料

酶解多肽按照实施例1方法制备。