[发明专利]纯化白喉毒素的方法

权利要求书

1.一种纯化白喉毒素的方法，其特征在于，包括：

(1)对含有白喉毒素的溶液进行粗提，以便得到白喉毒素粗品；

(2)将所述白喉毒素粗品进行浓缩，以便得到浓缩后的粗品；

(3)调节所述浓缩后的粗品的pH值至中性或碱性，以便得到调节pH后的粗品；

(4)将所述调节pH后的粗品分别进行疏水层析和离子交换层析，以便获得纯化后的白喉毒素。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，利用盐析法对所述含有白喉毒素的溶液进行粗提，优选地，利用10％-50％(w/v)硫酸铵溶液进行所述粗提，更优选地，为25％(w/v)硫酸铵溶液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述粗提是在pH4.0-7.0条件下进行的，优选地，为pH5.0。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述浓缩为超滤浓缩，优选地，利用10-50kD膜进行所述超滤浓缩，更优选地，为30kD膜。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，调节所述浓缩后的粗品的pH值至7.0-9.0，优选地，为8.0。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述疏水层析的疏水基团选自苯基、辛基和丁基的至少一种，优选地，为苯基。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述疏水层析是利用Phenyl Sepharose 6FF层析介质进行的。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述疏水层析利用含(NH₄)₂SO₄的第一缓冲液进行第一步梯度洗脱，

任选地，所述第一缓冲液为选自Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液的至少一种，

任选地，所述第一缓冲液的浓度为1-5mol/L，

任选地，所述含(NH₄)₂SO₄的第一缓冲液的pH值为7.0-9.0，优选地，为8.0，且(NH₄)₂SO₄的浓度为1-2mol/L。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离子交换层析是阴离子交换层析，

任选地，所述离子交换层析的层析介质为选自DEAE纤维素、DEAE Sepharose FF、Q-FF和Capto Q的至少一种，优选地，为DEAE纤维素，更优选地，为DEAE Sepharose FF层析介质。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离子交换层析是利用含NaCl的第二缓冲液进行第二步梯度洗脱的，

任选地，所述第二缓冲液为选自Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液的至少一种，优选地，为磷酸盐缓冲液，

任选地，所述第二缓冲液的浓度为1-100mmol/L，

任选地，所述含NaCl的第二缓冲液的pH值为6.0-8.0，优选地，为7.0，NaCl的浓度为不高于3mol/L。