[发明专利]VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种VZV重组gE‑鞭毛素融合蛋白及其制备方法和应用，其中，所述融合蛋白至少包括鞭毛素蛋白的N端保守区、水痘‑带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白gE和鞭毛素蛋白的C端保守区。本发明提供的VZV重组gE‑鞭毛素融合蛋白较单独的重组前gE蛋白可以引起更高的抗体滴度，因此具有较好的免疫活性，可以激发细胞免疫和体液免疫，且不具有引发潜在感染的风险，为新型水痘蛋白疫苗的制备奠定了良好的免疫学基础。

技术领域

本发明涉及一种VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白及其制备方法和应用，属于生物制药领域，尤其是基因工程疫苗领域。

背景技术

一、水痘-带状疱疹病毒概述

水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus，VZV)原发感染可引起水痘(chickenpox)和带状疱疹(herpes zoster，HZ)，具有较高的传染性和发病率。水痘是儿童时期常见的一种急性、高传染性疾病，患儿出现全身性皮疹，伴有发热、全身乏力等表现。带状疱疹常发生于中老年人，是一种出现在皮区的水疱病，其特征为神经疼痛及随神经支单侧分布的皮肤发疹。这两种疾病临床表现不同，却由同一种病毒引起，即水痘-带状疱疹病毒。VZV通过神经系统感染人体，经历两次病毒血症候，病毒到达皮肤表层，产生典型的疱疹样皮损，随后病毒进入周围神经系统，并且潜伏在脊神经节。待皮疹消退，患者痊愈后，有少量残存的病毒会终身潜伏于宿主的脊髓后根神经节、脑神经节及肠道神经节的神经细胞中。

VZV属于疱疹病毒科α疱疹病毒亚科，是一种双链DNA病毒，仅有一个血清型。病毒核衣壳直径约80～120nm，呈二十面体，周围包绕一层内膜及一层部分来自细胞膜的包膜。整个VZV颗粒直径为180～200nm。核心DNA至少包含71个开放阅读框，其中2/3是体外复制所必需的，包括重要的8种糖蛋白、DNA复制相关蛋白、DNA解旋、衣壳包装等相关蛋白。VZV主要由皮损部位疱液中的病毒颗粒通过空气传播。经上呼吸道黏膜或结膜感染后进入机体，在局部细胞内复制，约4～6天即出现原发性病毒血症和前驱症状，约2周出现水疱疹。感染水痘一般以轻型和中型病例较多，常见并发症为皮肤的继发性细菌感染，偶见多种皮肤外表现，如肺炎、脑炎、小脑性共济失调等。

对于免疫功能不足或无免疫力的新生儿，水痘是一种严重的、涉及多器官的致死性感染。免疫抑制儿童患水痘后病情会加重。成人感染VZV少见，但症状常很严重，多并发弥散性结石性肺炎，病死率高达10％～40％。孕妇患水痘时，胎儿可被感染甚至形成先天性综合症(CVS)。

二、水痘疫苗概述

对于水痘和带状疱疹，主要是对症处理，无特效治疗方法，抗病毒药物，如阿昔洛韦、伐昔洛韦、泛昔洛韦等，虽有助于水痘及HZ患者迅速康复，但不能终止病毒排出，无法预防隐性感染。而暴露VZV后给予过量的免疫球蛋白，对于中止或减轻疾病负担也是有限的，因此，疫苗在控制水痘感染方面发挥着重要作用，接种疫苗是最有效和最可靠的预防和控制水痘的手段。

水痘疫苗最早由日本的高桥(Takahashi)研究组于1974年研发成功。他们从1例3岁名叫Oka的水痘患儿体内分离出一株VZV，将其在人胚胎成纤维细胞34℃传11代，在豚鼠成纤维细胞37℃传12代和人二倍体成纤维细胞37℃传5代(WI-38和MRC-5)，成功减毒为活疫苗，称为Oka疫苗(vOka)。起初，vOka的安全性非常好，即使在免疫力部分损伤的白血病儿童和人类免疫缺陷病毒感染儿童中也没有出现严重不良反应，还显示处良好的免疫保护效果。但是接种vOka疫苗依次接种的免疫保护时间不够持久，且少数个体经依次接种未能达到有效保护状态。对那些年龄稍大如青春期的青少年，vOka的免疫效果低于1～12岁的儿童，因此对于学龄前儿童，需要对该疫苗进行二次接种。由于vOka是VZV减毒疫苗，因此还存在着一定的导致潜伏感染的风险。