[发明专利]VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白至少包括鞭毛素蛋白的N端保守区、水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白gE和鞭毛素蛋白的C端保守区，其中：

所述融合蛋白的N端为鞭毛素蛋白的N端保守区的N端，所述融合蛋白的C端为鞭毛素蛋白的C端保守区的C端；

所述鞭毛素蛋白的N端保守区的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:4所示，鞭毛素蛋白的C端保守区的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:5所示，所述水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白gE的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。

2.如权利要求1所述的VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白，其特征在于：编码所述水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白gE的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。

3.如权利要求1所述的VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白，其特征在于：鞭毛素蛋白的N端保守区的N端为所述融合蛋白的N端，鞭毛素蛋白的C端保守区的C端为所述融合蛋白的C端，水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白gE通过连接肽连接鞭毛素蛋白的N端保守区和鞭毛素蛋白的C端保守区。

4.如权利要求3所述的VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白N端保守区与水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白gE通过连接肽I连接，C端保守区与水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白gE通过连接肽II连接，所述融合蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:11所示。

5.如权利要求4所述的VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白，其特征在于：表达如序列表SEQ IDNO:11所示的融合蛋白的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:10所示。

6.制备根据权利要求1～5任一所述的VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、设计引物，扩增VZV糖蛋白gE基因序列的引物序列如SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示，扩增带组氨酸标签VZV糖蛋白gE基因序列的引物序列如SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15所示，扩增gE-鞭毛素融合基因序列的引物序列如SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17所示，扩增带组氨酸标签的gE-鞭毛素融合基因序列的引物列如SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：19所示，分别扩增VZV糖蛋白gE基因序列、沙门氏菌鞭毛素蛋白基因片段，并用融合PCR方法在基因末端添加HIS标签，目的基因拼接后，构建pET28a载体；

S2、将构建的pET28a-gE-鞭毛素转化至表达菌株BL21中，IPTG诱导，获得融合蛋白，收集菌体；

S3、大量诱导pET28a-gE-鞭毛素/BL21，破碎收集沉淀，用包涵体洗涤液重悬，离心；

S4、裂解缓冲液重悬沉淀，融合蛋白gE-鞭毛素经变性、复性及纯化步骤后，得到纯化后的gE-鞭毛素蛋白。

7.根据权利要求6所述的VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白的制备方法，其特征在于，S3具体为：沉淀用包涵体洗涤液I重悬后于离心；沉淀再以包涵体洗涤液II重悬，冷藏放置后离心；沉淀用包涵体洗涤液III重悬，室温放置后离心；沉淀用Lysis buffer重悬。

8.根据权利要求6所述的VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白的制备方法，其特征在于：S3步骤中的包涵体洗涤液I具体为50mM Tris-HCl、150mM NaCl、5mM EDTA及1mM PMSF；沉淀再以包涵体洗涤液II具体为2M尿素；沉淀用包涵体洗涤液III具体为50mM Tris-HCl、0.5％TritonX-100(v/v)、5mM EDTA及1mM PMSF；裂解缓冲液具体为Lysis buffer具体为100mMNaH2PO4、10mM Tris-HCl及8M urea，pH8.0。

9.一种免疫组合物，其特征在于：所述免疫组合物包括权利要求1～8任一所述的融合蛋白。

10.一种VZV疫苗，其特征在于：包括权利要求1～9任一所述的VZV重组gE-鞭毛素融合蛋白。