[发明专利]抗人血管内皮生长因子的抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗人血管内皮生长因子(VEGFA)的抗体及其制备方法和应用。该VEGFA抗体的重链可变区包括CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种，其氨基酸序列和核酸序列分别如本发明中所述。VEGFA抗体具有高亲和力和高生物学活性，与VEGF能很好地结合，并抑制或阻断VEGF与VEGFR的结合，从而影响其后续的信号通路以及相应的生物学功能，其在抗肿瘤、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、干癣、类风湿关节炎和慢性炎症中可以有很好的应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种抗人血管内皮生长因子的抗体及其制备方法和应用。

背景技术

血管发生是指通过内皮细胞的生长、分化和转移，从既存的血管形成新的血管的机制。众所周知，血管发生在创伤治愈以及女性的生理周期等正常生长过程中起重要作用(Risau,Nature,1997,386:671)，非正常的过度血管发生在肿瘤的生长和转移，以及年龄相关性黄斑变性(ARMD)、糖尿病性视网膜病变、干癣、类风湿关节炎、慢性炎症等疾病的发作中起关键作用(Carmeliet and Jain,Nature,2000,407:249)。

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)，亦称作血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor a，即VEGFA)，在血管生成过程的多个步骤中有重要作用，其在肿瘤区域的缺氧部位广泛分泌。VEGF已知有4个同种型VEGF121、VEGF165、VEGF189和VEGF206。报道指出VEGF165在除胎盘外的全部人类组织中大量存在(Tisher et al.,J Biol Chem,1991,266:11947)。已知VEGF以极高的亲和性与其受体VEGFR-1和VEGFR-2结合，但也通过VEGFR-2传递信号，诱导血管内皮细胞的增殖和转移等与血管发生相关的机制。因此，VEGF和VEGFR-2被当作抑制由VEGF诱导的血管发生机制的主要靶标(Ellis et al.,Nature Rev Cancer,2008(8):579-591；Youssoufian et al.,ClinCancer Res,2007,(13):5544-5548)。Genentech公司的Avastin是一种针对VEGF的人源化抗体(Ferrara et al.,Biochem.Biophy Res Comm,2005,333(2):328-335)已被美国食品与药品管理局(FDA)分别在2004年批准用于转移性结肠癌、在2006年批准用于非小细胞性肺癌和在2008年批准用于Her-2阴性转移性乳腺癌，并进入市场。近年，进行了大量对各种实体肿瘤的临床试验以扩大其适应症。此外，该公司购得的Lucentis是一种通过消化Avastin的仅一个Fab片断而产生的抗体，能提高当Lucentis被注射入视网膜时的渗透性，从而作为抑制老年性黄斑变性的主要症状的黄斑下过度血管发生(Eter et al.，Biodrugs,2006,(20):167-179)，其在2006年被美国FDA批准作为治疗湿性年龄相关性黄斑变性(湿性-ARMD)的治疗剂。另一个靶向VEGF的治疗用抗体是Regeneron公司的VEGF-trap(Holash et al.,PNAS,2002,(99):11393-11398)。这是一种将VEGFR-1的第二免疫球蛋白域和VEGFR-2的第三免疫球蛋白域融合于人类Fc获得的水溶性“诱饵受体”，在2011年获得美国FDA批准，用于治疗湿性黄斑变性。