[发明专利]一种苹果果肉原生质体的提取方法

权利要求书

1.一种苹果果肉原生质体的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、取苹果果肉薄片置于酶液中，得到混合物；

B、将步骤A中得到的混合物加入离心管中，在25-30℃黑暗环境中静置酶解，得到酶解初级产物；

C、将步骤B中得到的酶解产物过筛，过筛收集筛出物得到已酶解的苹果果肉汁，再加入甘露醇CPW溶液，经过离心、洗涤、沉淀得到苹果果肉原生质体；

在步骤A中，所述酶液的配置方法：以甘露醇CPW溶液为溶剂，加入MES 0.1％(w/v)，BSA0.1％(w/v)，PVP 1％(w/v)，离析酶R-10 1％(w/v)混合均匀即可，其PH值控制在5.6。

2.根据权利要求1所述一种苹果果肉原生质体的提取方法，其特征在于，在步骤A中，所述苹果果肉厚度为0.2cm，其苹果果肉薄片的质量与酶液的体积比为1:3。

3.根据权利要求1所述一种苹果果肉原生质体的提取方法，其特征在于，在步骤B中，所述酶解时间控制在20-30min。

4.根据权利要求1所述一种苹果果肉原生质体的提取方法，其特征在于，在步骤C中，所述过筛目数为300-350目。

5.根据权利要求1所述一种苹果果肉原生质体的提取方法，其特征在于，在步骤C中，所述甘露醇CPW溶液的配置方法：以水为溶剂，加入101.0mg/L KNO₃，27.2mg/L KH₂PO₄，246.0mg/L MgSO₄·7H₂O，1480.0mg/L CaCl₂·2H₂O，0.16mg/L KI，0.025mg/L CuSO₄·5H₂O，0.7mol/L甘露醇，混合均匀即可。

6.根据权利要求1所述一种苹果果肉原生质体的提取方法，其特征在于，在步骤C中，所述甘露醇CPW溶液与已酶解苹果果肉混合时温度控制在20-25℃。