[发明专利]一种基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法

权利要求书

1.一种基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤一.对土壤样品进行预处理：在待检测土壤区域中采用随机多点取样法选取采样点，采集耕层土壤内的土样后，将土样混合均匀，置于土壤袋后在室温下阴凉处风干，去除植物残根，磨碎后于室温避光保存备用；

步骤二.样品的浸提：称取步骤一制备的土样，过尼龙筛后用甲醇索氏提取，减压旋转蒸发浓缩，加入乙二醇后将该混合物继续浓缩备用；

步骤三.浸提液的毒性检测：取培养后的发光细菌培养液，加入步骤二制备的样品浸提液、15 wt.%NaCl溶液和纯净水，混匀后静置，测定发光强度；

步骤四.样品毒性的表达：测量步骤三静置后混合液的发光抑制率、氯化汞当量浓度。

2.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法，其特征在于，所述步骤一选取5个采样点。

3.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法，其特征在于，所述步骤二中称取3~5g步骤一制备的土样，过2 mm尼龙筛后用甲醇索氏提取16 h，减压旋转蒸发浓缩至5 mL，加入3~5 mL乙二醇，然后将混合物继续浓缩至5 mL备用。

4.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法，其特征在于，所述步骤三中发光细菌为明亮发光杆菌T₃。

5.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法，其特征在于，所述步骤三培养后的发光细菌培养液、样品浸提液、15 wt.%NaCl溶液和纯净水的体积比为1：2：4：13。

6.根据权利要求5所述的基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法，其特征在于，所述步骤三取50 μL培养后的发光细菌培养液，加入100 μL样品浸提液、200 μL 15 wt.% NaCl和650 μL纯净水。

7.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法，其特征在于，所述步骤三中培养后的发光细菌培养液的制备过程如下：取培养基含酵母浸出液0.5 g、胰蛋白胨0.5 g、甘油0.3 g、NaCl 3 g、Na₂HPO₄ 0.5 g、KH₂PO₄ 0.5g和蒸馏水100 mL混合均匀，调节p H值至6.5~7.0；第一代斜面菌种在20℃温度下培养24 h后，立即接入第二代斜面培养12 h后备用；将上述菌龄满12 h的新鲜斜面菌体接入盛有50 mL培养液的三角瓶中，接种量不超过1环，20 ℃、210 r/min振荡培养，每2 h测定1次培养液发光强度。

8.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法，其特征在于，所述步骤三中取培养16~18 h后的发光细菌培养液。

9.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法，其特征在于，所述步骤三中混匀后静置15 min。

10.根据权利要求1所述的基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法，其特征在于，所述步骤四中通过DXY-2型生物毒性测试仪检测浸提液对发光细菌的发光抑制率。