[发明专利]一种呋喃类代谢物衍生化试剂及其快速检测卡

说明书

本发明公开了一种呋喃类代谢物衍生化试剂及其快速检测卡。本发明衍生化试剂为含有醛基的化合物，且其一端改性修饰有一段核酸序列；所述醛基可与呋喃类代谢物相结合，形成呋喃类代谢物‑衍生化试剂‑核酸序列的复合物；所述核酸序列中有一个切刻酶位点和一个引物结合位点，可在DNA聚合酶和切刻酶的作用下产生大量的互补单链核酸序列。本发明呋喃类代谢物衍生化试剂可实现现场检测复杂体系中呋喃类药物代谢物，具有快速、简便、成本低的优点，检测过程无需大型设备，且检测结果可通过裸眼判读。本发明呋喃类代谢物衍生化试剂及其快速检测卡可用于食品安全等领域，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于小分子快速检测技术领域，更具体地说，涉及一种呋喃类药物代谢物的高敏快速检测所用的衍生化试剂及其快速检测卡，以用于食品、水质等现场对呋喃类药物的快速鉴别。

背景技术

呋喃类药物是一种高效的广谱抗生素，对革兰氏阳性和阴性细菌均有作用，被广泛用作治疗药物和饲料添加剂用于禽、畜、水产养殖中控制疾病或疫情，该药物包括：呋喃西林、呋喃唑酮、呋喃它酮和呋喃妥因四类。由于呋喃类药物存在一定的致癌性，欧盟、澳大利亚、美国和中国相继出台了相关法律，限制呋喃类药物在养殖业的使用。

呋喃类药物在动物体内极易降解为更小的分子，该类小分子代谢物易与蛋白质结合，且结合产物稳定不易分解，可在动物体内存留数周，常用的食品烹饪方法如蒸煮、煎炸、烘烤和微波加热等均无法使代谢物完全降解。因此该类代谢物常被用作检测呋喃类药物原药的标志物。

目前对检测呋喃药物代谢物的方法主要采用液液萃取高效液相色谱(HPLC)法、固相萃取高效液相色谱法、高效液相色谱串联质谱(LC-MS-MS)法、酶联免疫法、毛细管色谱分析方法等。这些方法主要不足在于都需要大型仪器，衍生物萃取纯化过程复杂，检测时间长等。而基于免疫学的检测方法如酶联免疫和快速胶体金检测卡则存在衍生物萃取、回收效率低、有机萃取试剂破坏抗体活性等问题，对检测的稳定性和精度会造成较大影响，极易产生较大的批间差，降低产品稳定性。因此，本领域迫切需要开发一种高敏、快速、简便、稳定的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于：克服现有呋喃类药物检测中存在的问题，提供一种高敏、快速、简便、稳定的的呋喃类代谢物衍生化试剂及其快速检测卡。

为了实现上述发明目的，本发明提供一种呋喃类代谢物衍生化试剂，所述衍生化试剂为含有醛基的化合物，且其一端改性修饰有一段核酸序列；所述醛基可与呋喃类代谢物相结合，形成呋喃类代谢物-衍生化试剂-核酸序列的复合物；所述核酸序列中有一个切刻酶位点和一个引物结合位点，可在DNA聚合酶和切刻酶的作用下产生大量的互补单链核酸序列。

作为本发明呋喃类代谢物衍生化试剂的一种改进，所述呋喃类代谢物-衍生化试剂-核酸序列的复合物可与标记于磁珠表面的特异性识别呋喃类代谢物-衍生化试剂的抗体结合，经磁性分离富集和清洗，形成磁珠-呋喃类代谢物-衍生化试剂-核酸序列的复合物。

作为本发明呋喃类代谢物衍生化试剂的一种改进，所述引物结合位点位于所述核酸序列的3’端，所述切刻酶位点与所述引物结合位点相邻，所述核酸序列的长度为30～200个碱基。

作为本发明呋喃类代谢物衍生化试剂的一种改进，所述核酸序列的长度为40～60个碱基。本发明呋喃类代谢物衍生化试剂可用于呋喃类药物代谢物检测中。

为了实现上述发明目的，本发明还提供一种呋喃类药物代谢物的快速检测卡，由底板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装而成；

所述底板具有粘性，样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸均粘贴在底板上；

所述样品垫为经含pH7～8的缓冲液处理并干燥后的玻璃纤维，且所述样品垫中部设置有上样孔；所述缓冲液包括磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、HEPES缓冲液或Tris缓冲液；

所述样品垫与所述硝酸纤维素膜之间有2～3mm的重叠；