[发明专利]一种优化的基于细菌细胞表面展示系统的目标物捕获体系有效
| 申请号： | 201710385615.4 | 申请日： | 2017-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN107266580B | 公开（公告）日： | 2020-12-11 |
| 发明（设计）人： | 王大鹏;许茜;倪培恩;刘丹蕾;殷玉洁;史贤明 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C07K1/14;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海旭诚知识产权代理有限公司 31220 | 代理人： | 郑立 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 优化 基于 细菌 细胞 表面 展示 系统 目标 捕获 体系 | ||
1. 一种优化的基于细菌细胞表面展示系统的目标物捕获体系，其特征在于，所述目标物捕获体系包括：能锚定在宿主菌细胞表面的冰核蛋白N端结构域，与所述冰核蛋白N端结构域相连的接头蛋白，以及与所述接头蛋白相连的病毒的衣壳蛋白，所述接头蛋白能被蛋白酶处理而断裂，使得所述病毒的衣壳蛋白脱离所述宿主菌的表面；所述接头蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No:3所示；所述冰核蛋白N端结构域的编码基因片段，其DNA序列如SEQ IDNo:2所示；所述病毒的衣壳蛋白的编码基因片段，其DNA序列如SEQ ID No:1所示；所述宿主菌为大肠杆菌BL21。
2.一种制备如权利要求1所述的优化的基于细菌细胞表面展示系统的目标物捕获体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）在所述病毒的衣壳蛋白的编码基因片段与编码所述冰核蛋白N端结构域的编码基因片段之间插入所述接头蛋白的编码基因片段，获得融合基因片段；
2）验证所述融合基因片段的脱氧核糖核酸序列；
3）将所述融合基因片段插入诱导型原核表达质粒，获得重组诱导型表达质粒；
4）将所述重组诱导型表达质粒转化入宿主菌，获得所述病毒的衣壳蛋白的细菌细胞表面展示系统；
5) 在诱导剂的诱导下使所述病毒的衣壳蛋白的细菌细胞表面展示系统展示在所述的宿主菌细胞表面，获得所述的目标物捕获体系。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤5）所述的诱导包括以下诱导步骤：
a）将转化有所述重组诱导型表达质粒的宿主菌接种于液体培养基中，在37℃条件下震摇培养12h~14h；
b) 将步骤a）中的细菌培养物以1.0%接种量，转接于新鲜培养基中，在37℃条件下震摇培养；
c) 待步骤b）中的细菌培养物OD600nm为0.6时，无菌条件下加入诱导剂后，26℃继续震摇培养16h；
d) 收集步骤c）中细菌培养物的菌体，将所述菌体重悬至无菌磷酸盐缓冲液中，OD600nm调节至1.0，得到菌悬液，即获得所述的目标物捕获体系。
4.如权利要求1所述的优化的基于细菌细胞表面展示系统的目标物捕获体系的应用，其特征在于，用于捕获和分离病毒受体，或用于目标外源蛋白的分离纯化。
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