[发明专利]一种新的肝星状细胞标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种新的肝星状细胞的标志物及其应用。

背景技术

肝纤维化是肝脏对慢性损伤做出反应所导致的肝细胞外基质堆积，其主要病因是慢性肝炎、慢性胆汁阻塞性疾病和慢性代谢性疾病等。早期肝纤维化往往不易被察觉，一旦进入进展期，就会因疤痕组织的堆积而破坏肝脏的正常结构和功能，最终发展为肝硬化。肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)的活化增殖是肝纤维化的关键环节，正常肝脏中HSC处于静息状态，增殖活性较低；在肝损伤及各种慢性肝病时HSC被激活，变成具有分泌功能的肌成纤维样细胞，合成和释放细胞外基质，同时分泌基质金属蛋白酶抑制因子，使细胞外基质降解减少，最终导致细胞外基质积聚而发生肝纤维化。

临床研究表明早期的肝纤维化是可逆的，肝纤维化的精准诊断能够更好的指导临床治疗。目前，病理学、影像学及血清学诊断是临床所采用的肝纤维化主要诊断方法。肝穿活检虽然具有损伤性，会引起部分病人的不适，但仍然是肝纤维化诊断的金标准。过去十年，在肝纤维化基础和临床研究中，发现了多种潜在的非侵袭性纤维增生标志物，但其临床应用效果不够理想。因此，寻找新的肝纤维化标志物对于肝纤维化的精准诊断非常重要。

肝白血病因子(hepatic leukemia factor，HLF)属于脯氨酸和酸性氨基酸含量丰富的碱性亮氨酸拉链转录因子家族成员，能够通过形成同型或异型二聚体的方式，结合靶基因启动子区特异的DNA序列并激活转录。国内外研究表明HLF在正常组织中不表达，在白血病细胞中有表达；我们也发现正常肝脏不表达HLF，HLF在肝纤维化中的作用未见报道。由于目前商品化的HLF抗体很少且均不能用于HLF的免疫组化检测，因此我们按照多抗制备的标准流程，利用大肠杆菌原核表达了HLF蛋白，纯化后免疫多只新西兰兔，蛋白A纯化阳性血清获得了多株多克隆抗体，并从中筛选到一株可检测组织中HLF表达的多克隆抗体。利用该抗体我们开展研究发现，相对于小鼠正常肝组织，小鼠肝纤维化组织中HLF表达升高；进一步研究显示，HLF在活化的HSC中呈高表达，并与临床肝纤维化进展有关，可以作为HSC活化与肝纤维化的新标志物。

目前，HLF作为HSC活化标志物及其在肝纤维化诊断中的应用未见文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供HLF的新用途，即HLF在HSC活化和肝纤维化过程中的应用。

本发明提供了HLF在HSC活化过程中的应用。

本发明提供了HLF在肝纤维化病理诊断中的应用。

本发明所述的HLF分子，是一种转录因子，属于碱性亮氨酸拉链转录因子家族成员。

本发明采用CCL4和BDL诱导的小鼠肝纤维化模型，经实验发现在对照组正常肝脏中HLF蛋白表达几乎检测不到，而在小鼠肝纤维化标本中HLF的mRNA和蛋白表达均明显上调。对分离的原代正常小鼠肝细胞、小鼠原代HSC检测后发现，正常小鼠肝细胞及静息状态下的HSC不表达HLF蛋白，只有活化的原代HSC表达HLF蛋白。由于目前市场上HLF的抗体均不能识别组织中HLF的表达，因此我们自行制备了可检测肝组织中HLF表达的多克隆抗体。利用该抗体我们开展研究发现，正常肝组织中HLF的表达水平极低，而在肝纤维化组织中表达升高，同时HLF仅在肝纤维化区域表达，且与HSC标志物a-SMA的表达基本重合。

因此，本发明认为，HLF特异表达于活化的HSC，并且HLF的表达与临床肝纤维化进展有关，可以作为HSC活化与肝纤维化的新标志物。

本发明的第一方面，提供了HLF可作为HSC活化标志物。

本发明的第二方面，提供了HLF可作为诊断肝纤维化的标志物。

本发明所述的临床样本，为人正常肝及人纤维化肝的石蜡包埋组织及冰冻组织。

附图说明

图1为小鼠肝正常组织、肝纤维化组织和原代正常肝细胞中HLF蛋白的表达变化。

图2为小鼠的原代HSC在0周和1周时HLF蛋白的表达水平；

图3为人正常肝组织(n＝8)和人肝纤维化样本(n＝48)中HLF mRNA的表达，p＜0.05；

图4为免疫荧光染色检测人肝纤维化组织中α-SMA与HLF的表达与定位；

图5为免疫组化检测人正常及人肝纤维化组织连续切片中胶原沉积(Sirius Red染色)、α-SMA和HLF表达的情况。

图6为HLF对人肝星状细胞(LX2)增殖的影响。

具体实施方式

现结合实施例和附图，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。