[发明专利]抑制HBV的siRNA分子及其应用

说明书

本发明公开了一种抑制HBV的siRNA分子，其由正义链和反义链组成，其中正义链选自奇数n序列号的SEQ ID NO:1‑159，反义链选自与上述奇数n相对应的偶数n+1序列号的SEQ ID NO:2‑160。该siRNA分子或者其表达框可用于制备抗HBV药物。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体地说，涉及抑制乙型肝炎病毒HBV的siRNA分子、及其在制备抗HBV药物中的用途。

背景技术

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染导致的传染性疾病，也是最严重类型的病毒性肝炎，它可造成慢性肝病，导致患者发生肝硬化和肝细胞肝癌的风险增高，严重威胁人类健康。

HBV是一种嗜肝性DNA病毒，属嗜肝DNA病毒科(hepadnaviridae)，全基因组长约3.2kb，为部分双链环状DNA，其基因组共有四个开放阅读框(Open Reading Frame，ORF)，编码蛋白包括表面抗原(S基因)、核心抗原(C基因)、聚合酶蛋白(P基因)和X蛋白(C基因)。

据世界卫生组织报道，全球大约有20亿人感染HBV，其中约有2.5-3.5亿的人为慢性乙肝感染者，估计每年有60万人死于HBV相关的肝脏疾病或肝细胞肝癌。HBV可急性引起肝脏炎症、呕吐、黄疸，在少数情况下引起严重的爆发性疾病和死亡。HBV也会造成慢性肝脏感染，以后可能发展成肝硬化或肝癌。

HBV的传播主要是通过母婴传染、未经保护的性传播、输血和注射毒品造成的感染，传播途径与人类免疫缺陷病毒(艾滋病毒)相同。HBV的传染性比艾滋病毒强50-100倍，HBV在体外可存活至少7天以上。

目前主要是通过接种乙型肝炎疫苗来预防乙型肝炎的发生，但不能用于治疗。目前有数种药物通过阻断HBV聚合酶来抑制HBV的复制，如拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦和替比夫定等。但是停药后复发率高，长期服用则可导致病毒变异，在用药一段时间后容易产生耐药性，使得临床抗病毒治疗面临极大的挑战。

近几年，RNA干扰(RNA interfering，RNAi)技术的迅速发展，部分RNA药物已进入临床试验阶段，为疑难杂症尤其是多因素的疾病如癌症、病毒感染开辟了全新的治疗途径。2016年12月23日，美国食品和药物管理局FDA批准了首个用于治疗脊髓性肌萎缩的RNA药物Spinraza(Nusinersen)的上市申请，标志着RNA药物正式加入药物大军，成为继化学药物、生物蛋白药物之后的第三大新药类型。RNAi技术是通过小干扰RNA(small interferingRNA，siRNA)干扰特定靶基因信使RNA(mRNA)的表达，来达到治疗疾病的目的，是基因治疗的重要组成部分。RNAi是由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)引发的转录后基因沉默，作用机制是：核糖核酸酶III家族的Dicer酶，与dsRNA结合，将其剪切成21-23nt及3'端突出的siRNA，随后siRNA与RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)结合，解旋成单链，活化的RISC受已成单链的siRNA引导，序列特异性地结合到靶基因的mRNA上并将其切断，引发靶mRNA的特异性分解，从而阻断其表达。RNAi已作为一种简单有效的基因敲除的技术，广泛地应用于功能基因组学研究以及抗病毒、抗肿瘤治疗的研究中。

本发明提供了一种用RNAi技术来抑制HBV的方法。应用RNA干扰技术，用靶向至HBV基因的siRNA作为靶向药物，在HBV基因组的转录后进行干扰，有效抑制HBV的蛋白表达，从而抑制病毒复制，该方法特异性强、效率高、副作用小、可持续用药，且能弥补目前乙型肝炎治疗药物的不足，在不久的将来可能成为一种新的治疗乙型肝炎的手段。

发明内容

为了提供有效地治疗乙型肝炎的新途径，本发明设计并筛选出一系列具有抑制HBV活性的RNA分子，可以特异性靶向HBV基因组转录本，达到抑制HBV的目的。