[发明专利]一种检测乙肝病毒标志物的免疫传感器的制备方法及应用

说明书

本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域，提供了一种检测乙肝病毒标志物的免疫传感器的制备方法及应用。采用MoS₂@Cu₂O/Pt作为检测抗体标记物制备的免疫传感器具有特异性强，灵敏度高和检出限低等优点，对乙肝病毒标志物的检测具有重要的科学意义和应用价值。

技术领域

本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域，提供了一种检测乙肝病毒标志物的免疫传感器的制备方法及应用。

背景技术

乙肝是一类遭遇乙肝病毒而导致肝脏损伤的有着传染性的疾病，生长和转移速度快，对人类的健康有极大的危害。鉴于乙肝具有耐药性和对体内免疫力都会造成巨大伤害等很多乙肝的病因。现阶段世界上还没有治愈乙肝的特效药，因此早期诊断对乙肝的预防和治疗具有重要的临床意义。

HBc、HBe、HBs等常见的乙肝病毒标志物，对乙肝的早期诊断具有重要意义。目前，对于病毒标志物的检测方法很多，如放射免疫分析法、免疫放射分析法、化学免疫发光分析法、时间分辨荧光免疫分析法等，但多数检测方法繁琐，操作复杂，费用昂贵，检出限高，因此，建立一种快速、简便、灵敏的检测方法有重要意义。

夹心型免疫传感器将高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术相结合，具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低等优点，在临床检验、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。而构建电化学免疫传感器的关键有两点：其一是采用简单、快速、有效的方法将标志物抗原、抗体等固定在电极表面；其二是开发传感器的信号放大技术。

多孔石墨烯负载金纳米粒子具有大的比表面积和生物相容性，可以显著提高捕获抗体Ab₁的固载量；良好的导电性可以加速电子传递，提高反应速率；新颖复合纳米材料MoS₂@Cu₂O/Pt具有良好的电催化性能，并且各组分协同作用，可以实现多重信号放大。

发明内容

本发明提供了一种检测乙肝病毒标志物的免疫传感器的制备方法及应用，实现了不同乙肝病毒标志物的高灵敏检测。

本发明的目的之一是以MoS₂@Cu₂O/Pt作为检测抗体标记物，构建一种超灵敏的夹心型免疫传感器。

本发明的目的之二是将所制备的夹心型免疫传感器用于乙肝病毒标志物的检测。

本发明的技术方案，包括以下步骤。

1. 一种检测乙肝病毒标志物的免疫传感器的制备方法，所述免疫传感器包括固定有乙肝病毒标志物抗体Ab₁的多孔石墨烯负载金纳米粒子修饰的电极和MoS₂@Cu₂O/Pt-Ab₂检测抗体孵化物溶液的制备，其中固定有乙肝病毒标志物抗体Ab₁的多孔石墨烯负载金纳米粒子修饰的电极的制备步骤如下：

(1) 将直径为3 ~ 5 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

(2) 将6 µL、0.5 ~ 2.0 mg/mL的多孔石墨烯负载金纳米粒子溶液滴涂在电极表面，晾干，用超纯水冲洗，晾干；

(3) 继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的乙肝病毒标志物抗体Ab₁溶液滴涂到电极表面，4℃冰箱中晾干；

(4) 超纯水冲洗掉未结合的Ab₁后，继续将3 ~ 5 µL、质量分数为0.1 ~ 1.0 %的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，以封闭电极表面上非特异性活性位点，4 ℃冰箱中晾干。

2.如权利要求1所述的一种检测乙肝病毒标志物的免疫传感器的制备方法，所述多孔石墨烯负载金纳米粒子，制备步骤如下：