[发明专利]一种检测乙肝病毒标志物的免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种检测乙肝病毒标志物的免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述免疫传感器的制备步骤包括固定有乙肝病毒标志物抗体Ab₁的多孔石墨烯负载金纳米粒子修饰的电极的制备和MoS₂@Cu₂O/Pt-Ab₂检测抗体孵化物溶液的制备，其中固定有乙肝病毒标志物抗体Ab₁的多孔石墨烯负载金纳米粒子修饰的电极的制备步骤如下：

(1) 将直径为3 ~ 5 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

(2) 将6 µL、0.5 ~ 2.0 mg/mL的多孔石墨烯负载金纳米粒子溶液滴涂在电极表面，晾干，用超纯水冲洗，晾干；

(3) 继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的乙肝病毒标志物抗体Ab₁溶液滴涂到电极表面，4℃冰箱中晾干；

(4) 超纯水冲洗掉未结合的Ab₁后，继续将3 ~ 5 µL、质量分数为0.1 ~ 1.0 %的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，以封闭电极表面上非特异性活性位点，4 ℃冰箱中晾干。

2.如权利要求1所述的一种检测乙肝病毒标志物的免疫传感器的制备方法，所述多孔石墨烯负载金纳米粒子，制备步骤如下：

将8 ~ 12 mL、0.5 mg/mL氧化石墨烯与200 µL、质量分数为1% 的HAuCl₄•4H₂O和20 µL、质量分数为1% 聚乙二醇溶液混合，超声1 h，使混合液均匀分散；将混合液转移到聚四氟乙烯反应釜中，加热至160～200℃，反应10～14 h；冷却至室温，超纯水离心洗涤3次；冻干机干燥，制得多孔石墨烯负载金纳米粒子。

3.如权利要求1所述的一种检测乙肝病毒标志物的免疫传感器的制备方法，所述MoS₂@Cu₂O/Pt-Ab₂检测抗体孵化物溶液的制备，步骤如下：

（1） MoS₂@Cu₂O的制备

将8 ~ 10 mL、1.0 ~ 1.5 mg/mL的(NH₄)₂MoS₄溶液和10 mL、4 mg/mL的Cu(NO₃)₂·3H₂O溶液分别超声10 min；将两种溶液混合并加入100 µL水合肼，超声30 min；混合液转移到聚四氟乙烯反应釜中，加热至150 ~ 250℃，维持8 ~ 12 h；冷却至室温，所得沉淀分别用超纯水和无水乙醇洗涤三次,分散在3 mL超纯水中，冻干机中干燥24 h，得到MoS₂@Cu₂O；

（2）氨基化MoS₂@Cu₂O的制备

将30 ~ 70 mg的MoS₂@Cu₂O加入到10 mL的无水甲苯中，加入0.2 ~ 0.4 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷，70 ℃回流1.5 ~ 2.5 h，超纯水离心洗涤三次； 80℃干燥12 h，得到氨基化MoS₂@Cu₂O；

(3) MoS₂@Cu₂O/Pt的制备

将8 ~ 12 mg 的氨基化MoS₂@Cu₂O加入到25 ~ 35 mL的Pt纳米粒子溶液中，振荡24 h，离心分离，得到MoS₂@Cu₂O/Pt，超纯水离心洗涤三次，干燥；

所述Pt纳米粒子溶液是用100 mL、质量分数为0.01%的H₂PtCl₆·6H₂O溶液加热至沸腾，逐滴加入10 mL、38.8 mmol/L的柠檬酸钠溶液，回流反应45 ~ 55 min，停止加热，继续搅拌10 min，冷却至室温制得；

④ MoS₂@Cu₂O/Pt-Ab₂检测抗体孵化物溶液的制备

在2 mL、2.0 ~ 3.0 mg/mL的MoS₂@Cu₂O/Pt加入2 mL、8 ~ 12 µg/mL的乙肝病毒标志物检测抗体Ab₂溶液，4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；超纯水离心洗涤三次，重新分散到2 mL、pH=6.98磷酸盐缓冲溶液，得到MoS₂@Cu₂O/Pt-Ab₂检测抗体孵化物溶液，4 ℃下保存备用。