[发明专利]一种肿瘤细胞检测方法

权利要求书

1.一种肿瘤细胞检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)制备环状模板；

2)向肿瘤细胞悬液中加入适体-引物复合探针，反应得到结合有适体-引物复合探针的细胞团，配制含有步骤1)所得环状模板的滚环扩增体系，将所述细胞团与滚环扩增体系混合，使得适体-引物复合探针识别并触发靶细胞表面滚环扩增，得反应液；

3)测定步骤2)所得反应液的比色信号。

2.根据权利要求1所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤1)中，环状模板序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤1)中，包括环状模板的连接反应和剪切纯化。

4.根据权利要求3所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤1)中，环状模板的连接反应包括：将引物链与锁式探针结合，得到环状模板，所述锁式探针为5’磷酸化的锁式探针，其序列如SEQ ID NO.1所示。

5.根据权利要求4所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤1)中，引物链序列如SEQ ID NO.2所示。

6.根据权利要求1所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤2)中，适体-引物复合探针序列如SEQ ID NO.3所示；

和/或，步骤2)中，适体-引物复合探针识别结合靶细胞时，将肿瘤细胞悬液与适体-引物复合探针混合后，反应时间为10-50min；

和/或，步骤2)中，将所述细胞团与滚环扩增体系混合后，反应时间为10-50min。

7.根据权利要求1所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤2)中，滚环扩增体系的总体积为25μL，其组成如下：dNTP 1μL、纯化后的环状模板10μL、phi29DNA polymerase 0.5μL、10×phi29 DNA polymerase缓冲液2.5μL、DEPC水11μL。

8.根据权利要求1所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤3)中，将hemin溶液与步骤2)所得的反应液混合，反应结束后，采用紫外分光光度计测定比色信号；

和/或，步骤3)中，将hemin溶液与步骤2)所得的反应液混合后，hemin的终浓度为0.2-1.8μΜ；

和/或，步骤3)中，将hemin溶液与步骤2)所得的反应液混合，反应结束后，加入ABTS^2-和H₂O₂溶液，采用紫外分光光度计测定比色信号。

9.根据权利要求1所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述靶细胞选自稀有肿瘤细胞。

10.根据权利要求9所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述靶细胞选自肺腺癌、肺鳞癌、乳腺癌、卵巢癌细胞。