[发明专利]融合表达IBDV VP2蛋白和沙门菌属外膜蛋白RCK的重组乳酸菌菌株及其用途

说明书

本发明公开了一种融合表达IBDV VP2蛋白和沙门菌属外膜蛋白RCK的重组乳酸菌菌株及其用途，本发明所述的重组乳酸菌菌株，含有经优化后的编码鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白以及沙门菌属外膜蛋白RCK融合蛋白的基因序列，其能够高效融合表达VP2蛋白和沙门菌属外膜蛋白RCK，且表达的融合蛋白VP2‑RCK以可溶性形式存在于乳酸菌的细胞质中。将本发明的重组乳酸菌菌株直接作为疫苗免疫鸡，实验结果表明：该重组菌株疫苗能有效诱导机体产生特异性的免疫应答，使免疫鸡获得100％的抵抗高致病力vvIBDV致死性攻击的保护，并可清除体内残留的病毒，达到清除性免疫的目的，本发明的提出为鸡传染性法氏囊病的防治提供了一种新的技术手段。

技术领域

本发明涉及一种重组乳酸菌菌株及其构建方法和用途，尤其涉及一种融合表达鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白和沙门菌属外膜蛋白RCK的重组乳酸菌菌株及其构建方法和用途，本发明属于医学或兽医学技术领域。

背景技术

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的能够引起鸡体免疫抑制的重要的病毒病，严重危害着世界的养鸡业。传统疫苗在防治该病的历史中起到非常重要的作用，随着该病近年来呈现的新的变化-血清型变异株，超强毒株的出现，使得对该病的防治越来越棘手，传统疫苗的研制速度已经有些难于跟上该病的变化。快速的开发新型有效的能防治变异和超强毒株的新型疫苗的要求尤为迫切。重组乳酸菌活载体基因工程疫苗是完全食品级安全的、无任何生物安全隐患的新型活载体疫苗。不仅保留病毒抗原性，更不存在散毒的危险。该疫苗的开发和应用将为防治当前流行的鸡传染性法氏囊病提供有效的工具和手段，并可为防治禽类免疫抑制病提供有效的参考和经验。

乳酸菌(Lactic acid bacteria)是一类在代谢性能、生理特征及形态上不完全相同的革兰氏阳性菌的统称，其总的特征是发酵碳水化合物时主要代谢产物是乳酸，G+，多数为不形成芽孢的对动物或植物具有益生特性的一类细菌。早期被人们用于食品发酵并取得了巨大的成功。随着对于益生乳酸菌的生理特性和分子遗传特性基础研究的深入，研究者们逐渐认识到乳酸菌作为递送异源抗原的活载体用于各种疾病的预防与治疗具有巨大的应用前景。特别是利用乳酸菌活载体疫苗不仅可以诱导机体产生系统性免疫应答，而且可以同时诱导机体的黏膜免疫应答。

伴随着分子生物学和基因工程技术的发展，出现了对于鸡传染性法氏囊病的一些新型的疫苗研究，其中主要有DNA疫苗、重组亚单位疫苗、基因工程活载体疫苗。其中活载体疫苗是指将致病微生物的主要抗原蛋白基因片段插入到表达载体中，然后将重组载体转到原核微生物或者细胞鸡真核微生物而得到的产物；或者是剔除致病微生非复制必须的毒力基因得到的基因缺失疫苗。目前主要是利用一些病毒载体(如：马立克病毒(MDV)、鸡痘病毒(FPV)、新城疫病毒(NDV)及禽腺病毒(ALV))表达IBDV的主要抗原蛋白VP2构建病毒活载体疫苗，其中Tsukamoto等利用HVT作为载体构建的rHVTpec-VP2重组活载体疫苗，在免疫鸡后，分别取得了致死剂量vvIBDV的攻毒保护率100％；随后Bublot团队和Le Gros团队分别开发的rHVT-VP2活载体疫苗在1日龄免疫接种雏鸡后，也取得了良好的免疫效果。目前利用乳酸菌构建重组乳酸菌IBDV-VP2活载体疫苗的研究预期取得了初步的进展，但是效果并不是非常理想，还需要进一步的探索和研究。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种含有经优化后的编码鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白和沙门菌属外膜蛋白RCK融合蛋白的基因序列的重组乳酸菌菌株，该重组乳酸菌菌株可以作为疫苗直接使用。

本发明的目的之二是提供由上述重组乳酸菌菌株表达产生的由鸡传染性法氏囊病病毒VP2以及沙门菌属外膜蛋白RCK组成的融合蛋白。

本发明的目的之三是提供由所述的重组乳酸菌菌株以及由该菌株表达得到的融合蛋白在制备预防鸡传染性法氏囊病毒感染药物中的应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：