[发明专利]一种高效的基因工程载体有效

专利信息
申请号: 201710331370.7 申请日: 2017-05-11
公开(公告)号: CN108866050B 公开(公告)日: 2022-12-27
发明(设计)人: 姜有为;李云飞;杜正伟 申请(专利权)人: 杭州菁因康生物科技有限公司
主分类号: C12N15/11 分类号: C12N15/11;C12N15/63
代理公司: 上海一平知识产权代理有限公司 31266 代理人: 崔佳佳;刘妍珺
地址: 311121 浙江省杭州*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 一种 高效 基因工程 载体
【权利要求书】:

1.一种核苷酸构建物,所述核苷酸构建物具有如下式所示的结构:

5’-A1-B1-C-B2-A2-D-3’ I;

其中,

A1、A2是同向重复序列;

B1、B2是反向重复序列;

C是标记基因;

D是外源基因表达盒;

或者

所述核苷酸构建物具有如下式所示的结构:

5’- D-A1-B1-C-B2-A2-3’ II;

其中

A1、A2是同向重复序列;

B1、B2是反向重复序列;

C是标记基因;

D是外源基因表达盒;

所述同向重复序列是100-700 bp的同向重复序列;并且

所述同向重复序列是外源转录终止子或外源转录启动子。

2.如权利要求1所述的核苷酸构建物,其特征在于,所述B1或B2是C的反向重复序列,当B1或B2是C的反向重复序列时,B1和B2中的另一个不存在。

3. 如权利要求1所述的核苷酸构建物,其特征在于,所述同向重复序列是100-500 bp的同向重复序列。

4. 如权利要求3所述的核苷酸构建物,其特征在于,所述同向重复序列是200-400 bp的同向重复序列。

5. 如权利要求3所述的核苷酸构建物,其特征在于,所述外源转录终止子选自:酿酒酵母的ADH1CYC1、和TIF51A转录终止子;毕赤酵母的ALG6AODAOX1ARG4PMA1TEF1转录终止子。

6.如权利要求3所述的核苷酸构建物,其特征在于,所述外源转录启动子选自:酿酒酵母的ADH1GAPPGK1TEF1启动子;毕赤酵母的GAPILV5PGK1TEF1启动子,AOX1FLD1诱导启动子。

7. 如权利要求1所述的核苷酸构建物,其特征在于,所述反向重复序列是600-1200 bp的反向重复序列。

8. 如权利要求7所述的核苷酸构建物,其特征在于,所述反向重复序列是700-1000 bp的反向重复序列。

9. 如权利要求7所述的核苷酸构建物,其特征在于,所述反向重复序列选自:大肠杆菌(E. coli) lacZ基因、沙门氏菌 (Salmonella) hisG 基因、毕赤酵母URA3基因、毕赤酵母URA5基因。

10.如权利要求1所述的核苷酸构建物,其特征在于,所述核苷酸构建物中包含多个外源基因表达盒或多个标记。

11.如权利要求1所述的核苷酸构建物,其特征在于,式I所示核苷酸构建物中的所述外源基因表达盒中不含自身的转录终止子;式II所示核苷酸构建物中的所述外源基因表达盒中不含自身的转录启动子。

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