[发明专利]一种沙门氏菌抗体乳胶凝集检测方法

权利要求书

1.一种沙门氏菌抗体乳胶凝集检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

将SEN4030a蛋白，连接到空白乳胶微球上，制备致敏乳胶微球；

将致敏乳胶微球与待测样品混匀反应，观察凝集结果。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述SEN4030a蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述致敏乳胶微球的制备方法为：

将预处理后的空白乳胶微球溶液与SEN4030a蛋白溶液混合，在4-80℃下偶联1-40小时。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述空白乳胶微球溶液的浓度为0.1-10wt％，所述SEN4030a蛋白溶液的浓度为0.1-5mg/ml。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，在10-40℃下偶联3-10小时，所述空白乳胶微球溶液的浓度为0.1-3wt％，所述SEN4030a蛋白溶液的浓度为0.1-3mg/ml。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，在37℃下偶联5小时，所述空白乳胶微球溶液的浓度为1wt％，所述SEN4030a蛋白溶液的浓度为0.6-0.7mg/ml。

7.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述预处理的方法为：将空白乳胶微球加入去离子水，离心，再加入缓冲液稀释，然后加入TritonX-100。

8.根据权利要求1-7所述的检测方法，其特征在于，所述SEN4030a蛋白的制备方法为：

根据肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritis)的SEN4030a的基因序列，如SEQ ID No.2所示，设计引物克隆目的基因，构建其PET-32a表达载体，转化至工程菌中BL21中进行蛋白诱导表达，然后分离纯化SEN4030a蛋白。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述蛋白诱导表达的方法为：将细菌培养至OD600nm为0.4-0.8时，加入IPTG培养1-7h，其中IPTG浓度为0.1-3mm/mL；

所述分离纯化的方法为：裂菌后收集上清，上层析柱，然后透析。

10.一种沙门氏菌蛋白乳胶凝集检测试剂盒，其特征在于，包括：

SEN4030a蛋白溶液、空白乳胶微球悬浊液；

缓冲溶液A、处理液B；

所述缓冲溶液A为40mmol/L的MES缓冲液；处理液B为体积浓度为0.05％的Triton X-100溶液。