[发明专利]一种提高幽门螺杆菌致病菌株抗体检出率的改性胶乳免疫比浊测定试剂盒

权利要求书

1.一种提高幽门致病菌株抗体检出率的改性胶乳免疫比浊试剂盒，包含试剂1、试剂2、校准品、低值质控品和高值质控品，其各组分及浓度范围为：

试剂1：

pH为7.4～8.4，

试剂2：

pH为6.5～7.5，

校准品：

低值/高值质控品：

所述特异性东亚幽门螺杆菌抗原包括东亚幽门螺杆菌全菌体蛋白抗原；

所述改性胶乳颗粒为超支化聚缩水甘油醚修饰的聚苯乙烯乳胶，由粒径为50nm～80nm和粒径为250nm～300nm两种微粒组成。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的东亚幽门螺杆菌抗原是由如下步骤制备而成：

1)从幽门螺杆菌患者中分离出幽门螺杆菌；

2)对分离出的幽门螺杆菌做CagA和VacA的PCR并测序；

3)根据测序结果筛选出东亚菌株；

4)对东亚菌株进行扩大培养；

5)细胞破碎，离心，提取上清，纯化及蛋白浓度测定。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于所述特异性东亚幽门螺杆菌抗原包被的改性胶乳颗粒制备方法如下：

1)胶乳微球的修饰：将超支化聚缩水甘油醚溶解于吡啶中，用丁二酸酐(Suc)进行修饰得到含有大量羧基的超支化聚缩水甘油醚；

2)胶乳颗粒标记：用含1％甘油，0.01％十二烷基葡萄糖苷的10mmol/LpH7.4磷酸缓冲液将胶乳颗粒稀释成5mg/mL，按与超支化聚缩水甘油醚微球所含羧基的摩尔比1:3～5的比例加入4-(4，6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(DMTMM)，混匀活化5-10min；按与超支化聚缩水甘油醚羧基微球质量比：1:30～60加入待偶联抗原，37℃摇床孕育1h～3h；加入含有0.5％BSA，0.01％十二烷基葡萄糖苷，5％甘油及0.05％Proclin300的10mmol/LpH7.4磷酸缓冲液，37℃摇床封闭1h～3h；0.22μm滤膜过滤；将标记完成的乳胶颗粒分装成1mL/支，4℃保存；

3)使用上述步骤分别对粒径为50nm～80nm和粒径为250nm～300nm的超支化聚缩水甘油醚修饰的聚苯乙烯乳胶进行标记；将标记后的胶乳进行混合，按质量体积百分比计，粒径为50nm～80nm的胶乳浓度为0.65％～0.85％，粒径为250nm～300nm的胶乳浓度为0.15％～0.35％，混合，4℃保存。