[发明专利]一种高生长性多功能干细胞培养基

说明书

技术领域

本发明属于干细胞技术领域，具体涉及一种高生长性多功能干细胞培养基。

背景技术

在多功能干细胞的培养基研制领域，Stemcell公司的TeSR-E8培养基和Life公司的E8培养基是较为成熟多功能干细胞培养基。

TeSR-E8培养基主要存在的缺点包括但不限于：（1）TeSR-E8培养基中添加有促进重编程的小分子化合物或者β-巯基乙醇，其会造成明显的细胞毒性，限制了多功能干细胞的低密度培养；（2）TeSR-E8培养基中的细胞因子含量较高，导致该培养基的成本很高。

因此，开发可以促进多功能干细胞培养且所用添加物较少的培养基是本领域的研发方向之一。然而，现有的研究还未获得效果良好的成果。目前仅知柠檬酸铁可一定程度上替换TeSR-E8培养基中的人脱铁转铁蛋白。

在促进干细胞的培养方面，通常的方法是控制环境因素（如氧含量、培养空间）和添加一些功能因子（如EGF等）。《Enhancement of human neural stem cell self-renewal in 3D hypoxic culture》通过控制培养空间的维度、氧含量和添加一定浓度的EGF和FGF-2促进了 hNSCs的增值和分化。通过添加适量的活性氧可以起到促进干细胞功能的维持，在这一基础上，《活性氧对诱导多功能干细胞（iPS）的作用及功能研究》进行了比较深入研究。《Substance P enhances proliferation and paracrine potential of adipose-derived stem cells in vitro 》研究了Substance P对于ADSCs的体外培养的影响。

另外，目前较为急迫的是关于无动物制品的培养基的研发。在这方面，CN 103952374 B提供了一种很好的思路，并得到了不错的效果。不过，其缺点是添加组分过多，成本较高，产业化前景较差。

在无血清干细胞培养基方面，丙酮酸钠的添加是比较重要的，如申请号为201310134502.9的中国专利《一种无血清的脂肪间充质干细胞培养基》和申请号为201410018678.2的中国专利《培养胎盘间充质干细胞的无血清培养基》中均添加了丙酮酸钠。

申请号为201610570585.X的中国专利利用了四甲烯二胺作为活性因子之一，并配合其它添加成分制备出了一种可以促进干细胞增值速度的培养基。该物质在申请号为申请号为201210564154.4的中国专利中同样被采用，可用于培养和扩增间充质干细胞。

在一些已知的干细胞无血清培养基中，尼克酰胺也被作为添加剂之一。如申请号为201611087240 .5的中国专利利用了尼克酰胺作为添加剂。不过该专利需加入Ultroser G血淸替代物才能实现培养基的无血清化，成本较高。

综上所述，本领域亟需一种可以促进多功能干细胞增值的无血清培养基。

发明内容

本发明的目的旨在解决本领域技术问题的一种高生长性多功能干细胞培养基，其成分为：

DMEM/F12培养基;

0.5~0.9 mg/L尼克酰胺、22~25 mg/L FGF-2、 0.001~0.003 mg/L硒酸钠、0.2~0.3 mg/L碳酸氢钠、350~400 μg/L 柠檬酸铁、200~300 μg/L IL-6 和 50~60 μg/L 四甲烯二胺；

上述组分的浓度均以添加至DMEM/F12培养基中的浓度计。

优选的，所述柠檬酸铁的浓度为360~380 μg/L 。

优选的，所述尼克酰胺的浓度为0.6~0.8 mg/L。

优选的，所述FGF-2的浓度为23 mg/L。

优选的，所述硒酸钠的浓度为0.002 mg/L。

优选的，所述IL-6的浓度为260 μg/L。

所述培养基在使用前配置，于0-8℃下保存。

本发明发现，利用四甲烯二胺和硒酸钠可以替换现有技术报道的丙酮酸钠，在不影响多功能性的同时，可以使得多功能干细胞更快的增殖。

成纤维细胞生长因子常用作细胞培养基的添加成分，无论是在多功能性干细胞和其它干细胞的已公布培养基中，均被当做主要的添加物之一（如中国专利201611087240 .5和中国专利201610508983 .9）。