[发明专利]一株产菊粉内切酶的毕赤酵母重组菌及其在高密度发酵产菊粉酶中的应用

权利要求书

1.一株产菊粉内切酶的毕赤酵母重组菌，其特征在于，将SEQ ID NO.1所示的基因序列克隆到pPIC9K中，得到重组质粒，再将重组质粒转化毕赤酵母GS115，既得到产菊粉内切酶的毕赤酵母重组菌。

2.一种利用毕赤酵母重组菌高密度发酵产菊粉酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)种子液制备：将产菊粉内切酶的毕赤酵母重组菌接种于活化培养基上活化，再转接到BMGY液体培养基中，在28～30℃、200～250r/min条件下培养12～18h，得到种子液；

(2)高密度发酵：将步骤(1)得到的种子液转接到基础培养基中，在发酵罐中培养，发酵条件为：温度28～30℃、搅拌速度800～1000r/min、溶氧量20％～30％、通气量为5～6L/min，控制发酵pH为5.5～6，培养6h之后开始流加补充培养基，每隔12h补加甲醇至终体积浓度为0.5％，培养64～72h。

3.根据权利要求2所述的利用毕赤酵母重组菌高密度发酵产菊粉酶的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述活化培养基的配方如下：酵母膏10g/L、蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L。

4.根据权利要求2所述的利用毕赤酵母重组菌高密度发酵产菊粉酶的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述BMGY液体培养的配方如下：胰蛋白胨20g/L、酵母浸膏10g/L121℃，灭菌20min后，加入100mmol/L pH＝6的磷酸钾，无氨基氮源13.4g/L，生物素4×10^-4g/L，甘油10g/L。

5.根据权利要求2所述的利用毕赤酵母重组菌高密度发酵产菊粉酶的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述基础培养基的配方如下：硫酸铵10g/L、磷酸二氢钾6g/L、硫酸镁1g/L、EDTA 3mg/L、硫酸锌1g/L、硫酸亚铁5mg/L、硫酸铜1mg/L、氯化钙1g/L、氯化锰0.5mg/L、氯化钴0.8mg/L、碘化钾0.2mg/L、钼酸钠0.05mg/L、烟酸5mg/L、生物素0.8mg/L、葡萄糖10g/L。

6.根据权利要求2所述的利用毕赤酵母重组菌高密度发酵产菊粉酶的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述补充培养基的配方如下：硫酸铵10g/L、磷酸二氢钾10g/L、硫酸镁0.05g/L、EDTA 2mg/L、硫酸锌0.08g/L、硫酸亚铁2mg/L、硫酸铜0.5mg/L、氯化钙0.5g/L、氯化锰0.3mg/L、氯化钴0.8mg/L、碘化钾0.1mg/L、钼酸钠0.03mg/L、烟酸5mg/L、生物素1mg/L、葡萄糖50g/L、消泡剂0.05ml/L。