[发明专利]一种头孢菌素发酵液中还原糖的测定方法

说明书

本发明公开了一种头孢菌素发酵液中还原糖的测定方法，步骤如下：(1)取头孢菌素发酵液，过滤，离心，得上清，采用菲林试剂测定，得到还原糖数值测定值X₁；(2)计算影响值，影响值X₂＝0.4335×头孢菌素效价+0.0181；(3)(X₁‑X₂)的值即为头孢菌素发酵液中还原糖的实际值。本方法能够准确测定头孢发酵液中还原糖含量，避免了因头孢菌素本身消耗斐林试剂对还原糖测定带来的干扰，与现有方法相比，能够提高还原糖测定准确度。

技术领域

本发明涉及一种头孢菌素发酵液中还原糖的测定方法。

背景技术

头孢菌素抗菌活性弱，基本无临床价值，但以头孢菌素为起始原料，可以得到7-ACA与7-ADCA两大β-内酰胺类头孢母核，进而经化学修饰可生产数十种临床常用的头孢类药物，该类药物毒性远低于青霉素类药物，不易水解，稳定性也较好，是目前世界用量较大的一类抗生素。

目前，头孢母核可以通过生物发酵法、6-APA扩环、直接用青霉素扩环生产，而生物发酵法是得到头孢母核的最环保的生产方式。

头孢菌素C的结构与青霉素相似，具有一内酞胺环，母核均为一氨基头抱烷酸，其结构式如下：

头孢菌素的发酵过程是一个复杂的多因素控制过程，而糖的代谢调控是工艺控制过程的主要控制因素，糖浓度的波动要控制在一定范围内，浓度过低使抗生素合成速度减慢或停止，过高则导致呼吸活性下降，甚至引起自溶。所以头孢发酵需对发酵过程中还原糖含量准确监控，以保证发酵生产平稳运行，而且在提高发酵单位和降低成本方面也具有重要意义。

目前普遍采用的检测还原糖含量方法是菲林试剂法。但是由于头孢菌素也能与菲林试剂发生反应，对检测结果产生较大干扰。所以检测方法不能真实反应发酵液中还原糖的真实水平。

发明内容

本发明研发了一种改良的斐林试剂测定头孢菌素发酵液中还原糖的方法。

本发明头孢菌素发酵液中还原糖的测定方法，其特征在于：步骤如下：

(1)取头孢菌素发酵液，过滤，离心，得上清，采用菲林试剂测定，得到还原糖数值测定值X₁；

(2)计算影响值，影响值X₂＝0.4335×头孢菌素效价+0.0181；

(3)(X₁-X₂)的值即为头孢菌素发酵液中还原糖的实际值。

步骤(1)中，过滤的条件是，离心得条件是。

步骤(1)中，所述菲林试剂包括CuSO₄溶液、酒石酸钾钠和氢氧化钠混合液和30％碘化钾溶液。

优选地，CuSO₄溶液按照如下方法制备：称取CuSO₄·5H₂O 62.5g，用水溶解并稀释至1000ml，摇匀，即得；

酒石酸钾钠和氢氧化钠混合液按照如下方法制备：称取188g酒石酸钾钠(C₄H₄KNaO₆·4H₂O)和125g氢氧化钠(NaOH)，用水溶解并稀释至1000ml，摇匀，即得。

30％碘化钾溶液按照如下方法制备：称取150g碘化钾，用水溶解并稀释至500ml，摇匀，即得。

步骤(1)中，所述测定的方法是：