[发明专利]葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的制备方法及其应用

权利要求书

1.葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶溶于水中，按照葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶的酶活比为1：1～20混合，得到酶混合溶液；

(2)向步骤(1)得到的酶混合溶液中加入蛋白保护剂，得到溶液A，所述的蛋白保护剂为：伴刀豆蛋白A、聚赖氨酸、PEG-NH₂、牛血清蛋白、海藻糖或聚乙二醇；

(3)向步骤(2)得到的溶液A中加入沉淀剂和交联剂，得到溶液B，所述的沉淀剂为无水乙醇或异丙醇；所述的交联剂为戊二醛、香草醛、PEG-CHO中的一种或几种的混合物；

(4)向步骤(3)得到的溶液B中加入还原剂，所述的还原剂为硼氢化钠或氰基硼氢化钠，反应，收集固形物，用磷酸缓冲液洗涤，既得到葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体。

2.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的蛋白保护剂的终浓度为0.5～10mg/mL。

3.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，沉淀剂与溶液A的体积比为1～5:1。

4.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，交联剂与溶液A的质量比为0.5～5:100。

5.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，加入沉淀剂和交联剂后反应的温度为4～25℃，反应时间为1～5h。

6.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，还原剂的终浓度为10～100mmol/L，加入还原剂后的反应时间为10～60min。

7.权利要求1～6任一所述的葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的制备方法制备得到的葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体。

8.权利要求6所述葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体在制备葡萄糖酸或葡萄糖酸盐中的应用，所述葡萄糖酸盐包括葡萄糖酸钙、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸钠、葡萄糖酸亚铁。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，葡萄糖酸的生产过程如下：将葡萄糖溶液、葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体加入反应器中，反应温度30～45℃，以0.1～10mL/min的速度通入氧气，氧化至反应液中无残糖时终止反应，得到葡萄糖酸。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，葡萄糖盐的生产过程如下：将葡萄糖溶液、葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体加入反应器中，反应温度30～45℃，以0.1～10mL/min的速度通入氧气，加入碳酸钙溶液、氧化锌悬液、氢氧化钠溶液或氢氧化亚铁溶液，得到葡萄糖酸钙、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸钠或葡萄糖酸亚铁。

11.根据权利要求9或10所述的应用，其特征在于，所述的葡萄糖溶液中葡萄糖的浓度为100～500mg/mL，葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶的交联酶聚体的加入量为100～500mg。