[发明专利]一种富硒天然多功能叶面肥及其制备方法

权利要求书

1.一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)富硒菌株选育

将产朊假丝酵母Candida utilis进行氮离子注入诱变，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株C.utilis cas3；

(2)种子培养液制备

将上述产朊假丝酵母突变菌株C.utiliscas3接种在斜面培养基，得到斜面菌株，再将斜面菌株接种于种子培养基中，得到种子培养液；

(3)发酵培养

将种子培养液按体积百分含量8～12％的接种量接种至含有发酵培养基中发酵10～12h至对数生长期，在发酵产物中补加终浓度为150～180mg/L的亚硒酸钠，继续发酵培养20～24h，收集发酵产物；

(4)富硒酵母水解物的获得

将酵母发酵液，离心洗涤后加入混合酶制剂，酶法水解后得到富含有机硒和氨基酸的酵母水解物，水解产物干燥后得到淡黄色固体粉末状制品，水分含量小于10％；

(5)盐肤木提取液制备

取盐肤木叶子、嫩枝和果皮中的一种或多种，干燥后粉碎得到盐肤木细粉；将盐肤木细粉按1g：10～30ml的料液比加入至提取液进行提取，得到盐肤木提取液；

(6)微量元素溶液制备

将硼酸、一水硫酸锌、七水硫酸亚铁、一水硫酸锰按照重量比1～3：2～4：1～2：3～5的比例混合，溶于一千倍质量的水中，搅拌混匀，即制得微量元素溶液；

(7)富硒天然多功能叶面肥制作

将富硒酵母水解物、盐肤木提取液、微量元素液按照重量比1～3：20～30：1～2的比例复配，混合后加热至60～70℃，搅拌至充分溶解后，再加入凹凸棒土继续搅拌至充分溶解后即可。

2.根据权利要求1所述的一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，包括以下步骤：

(11)产朊假丝酵母Candida utilis采用YEPD培养平板上培养24～30h，挑取单菌落至含YEPD液体培养基的培养瓶中，160～180rpm，震荡培养24～30h，菌液离心洗涤，制成单细胞悬液，使细胞浓度在10⁸～10⁹个/mL；

(12)将菌悬液均匀涂布到无菌培养皿中，风干制成菌膜；

(13)在N⁺注入机中进行离子注入，能量14～18KeV；

(14)每个菌株做6个梯度剂量，每个剂量两个平板，N⁺注入剂量分别为2.5×10¹⁴、4.5×10¹⁴、6.5×10¹⁴、8.5×10¹⁴、1.5×10¹⁵、1.8×10¹⁵ion/cm²，并做真空对照平板；

(15)诱变完成后，加入无菌水洗涤菌体制成菌悬液；

(16)将菌悬液稀释10⁴～10⁸倍涂布于含亚硒酸钠的筛选培养基，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的酵母突变菌株，而且其发酵生物量在同等条件下比出发菌株提高了2倍以上，命名为C.utilis cas3。

3.根据权利要求1所述的一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，斜面培养基包括以下组分：葡萄糖15～20g/L，蛋白胨15～20g/L，酵母膏5～10g/L，亚硒酸钠20～30mg/L，琼脂12～18g/L。

4.根据权利要求1所述的一种富硒天然多功能叶面肥的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，种子培养基包括以下组分：麦芽抽提物10～20g/L，蛋白胨10～15g/L，酵母膏5～10g/L，亚硒酸钠30～60mg/L。