[发明专利]用于二代测序的接头

权利要求书

1.成套试剂在建立二代测序文库中的应用，

所述成套试剂由两条名称分别为A链和B链的单链DNA组成；

所述A链从5′端至3′端如式（Ⅰ）所示：

A1-A3-A2

式（Ⅰ）；

所述B链从3′端至5′端如式（Ⅱ）所示：

B1-B2

式（Ⅱ）；

所述A3的每个核苷酸均为A、T、C或G；

所述A2与所述B2互补；所述A1与所述B1不互补；

所述A3与所述B1及所述A1均不互补；

所述A1和所述A2的序列不同；所述B1与所述B2的序列不同；

所述A链的序列为序列表中序列1；所述B链的序列为序列表中序列2；

所述A1的序列为序列表中序列1的第1-22位；

所述A2的序列为序列表中序列1的第37-50位；

所述A3的序列为序列表中序列1的第23-36位；

所述B1的序列为序列表中序列2的第14-37位；

所述B2的序列为序列表中序列2的第1-13位；

所述应用先将A链与B链等摩尔量混合，如下程序退火：94°C，5min；30°C，15min，使所述A链的A2与所述B链的B2进行配对形成Y型DNA片段，再将所述Y型DNA片段与待测样本的目的DNA连接，得到所述DNA文库；

所述B链的序列为Illumina接头的序列；

所述A2中3′末端核苷酸为硫代核苷酸；

所述B2中5′末端核苷酸为磷酸化修饰的核苷酸。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述文库构建的方法还包括在对所述目的DNA连接所述Y型DNA片段前对所述目的DNA进行末端补齐和加A；

所述末端补齐与所述加A在同一反应体系中进行。