[发明专利]一种母血浆游离DNA文库的构建方法以及父源等位基因的分型方法

权利要求书

1.一组扩增母血浆游离DNA中SNP的特异性引物组，其特征在于，包括720对引物，上下游引物序列依次如SEQ ID NO.1～1440所示。

2.一种母血浆游离DNA文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）制备待测样本DNA，其中包括孕妇外周血基因组DNA和孕妇外周血血浆游离DNA；

（2）利用权利要求1所述的720对引物进行超多重PCR复合扩增；

（3）在扩增得到的720条片段两端分别连接标签序列的接头和公用接头。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述超多重PCR复合扩增的反应体系为：5 × Ion AmpliSeqTM HiFi Mix 4.0µl、引物组10.0µl、模板6.0µl；

所述超多重PCR复合扩增的反应程序为：酶激活99℃ 2min； 99℃ 15s，60℃ 4min，19个循环或18个循环；冷却到10℃保存。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，在步骤（3）之前，还需先消化步骤（2）扩增产物中多余的引物。

5.根据权利要求2～4任一所述方法构建得到的母血浆游离DNA文库。

6.一种游离DNA中父源等位基因的分型方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将权利要求5所述的文库纯化；

S2.将纯化后的文库进行qPCR定量；

S3.选择合适的文库数目，进行测序模板的制备和测序；

S4.数据分析，确定父源等位基因的分型：对于常染色体SNP，选择母血细胞分型为纯合子的SNP位点，分析母血浆游离DNA在相应位点中的测序数据，计算非母等位基因的百分比浓度，将浓度超过2.0%的非母等位基因定义为父源等位基因；对于Y染色体，SNP序列可直接获取。

7.一种游离DNA中父源等位基因的分型试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的720对引物。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括构建权利要求2所述文库所需的试剂。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括权利要求6所述游离DNA中父源等位基因的分型方法中所需的试剂。