[发明专利]一种利用飞行时间质谱鉴别蓝藻细胞的方法

权利要求书

1.一种利用飞行时间质谱鉴别蓝藻细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)对待鉴别蓝藻细胞样品进行前处理；

(2)将步骤(1)处理后的样品滴入样品板上，再滴入基质溶液，室内风干；

(3)将步骤(2)得到的样品板放入飞行时间质谱测定仪进行测定，以核糖体蛋白质作为生物标识物，测定出的图谱与所选择的特征核糖体蛋白理论峰值进行比对后实现对蓝藻种类的鉴别。

2.根据权利要求1所述的利用飞行时间质谱鉴别蓝藻细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的前处理，无需提纯蛋白质，只需破碎和离心即可。

3.根据权利要求2所述的利用飞行时间质谱鉴别蓝藻细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的前处理具体过程为：将样品进行超声波除泡，离心后去除上清液，取沉淀物离心后再取沉淀，所得沉淀加入TMA-1缓冲液混匀，移入装有氧化锆-二氧化硅微粒的细胞破碎专用离心管，置入细胞破碎仪进行机械破碎；将机械破碎后的样品低速离心后取上清液；上清液再经高速离心后获得核糖体亚单位沉淀物。

4.根据权利要求3所述的利用飞行时间质谱鉴别蓝藻细胞的方法，其特征在于，所述的TMA-1缓冲液为含10mM pH 7.8Tris-HCl缓冲液，30mM的氯化铵，10mM的氯化镁以及6mM的2-巯基乙醇。

5.根据权利要求2所述的利用飞行时间质谱鉴别蓝藻细胞的方法，其特征在于，所述的低速离心，离心条件为5800g，4℃，离心25分钟；所述的高速离心，离心条件为64000g，4℃，离心4小时。

6.根据权利要求1所述的利用飞行时间质谱鉴别蓝藻细胞的方法，其特征在于，步骤(2)中，将步骤(1)处理后的样品加入混合液A混匀后，再取2μL滴于样品板靶位上，再滴入1.5μL基质溶液覆盖，在空气中自然风干；所述的混合液A为含50％v/v乙腈和1％v/v三氟乙酸的水溶液；所述的基质溶液为含10mg芥子酸，0.5mL混合液A和0.5mL蒸馏水的混合溶液。

7.根据权利要求1或3所述的利用飞行时间质谱鉴别蓝藻细胞的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的生物标识物为13个核糖体蛋白质，分别为L32，S21，L33，L35，S18，L29，L31，L28，S16，S19，S15，S20以及S14。

8.根据权利要求1所述的利用飞行时间质谱鉴别蓝藻细胞的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的飞行时间质谱测定仪为配备N₂的激光脉冲仪的Axima CFR Plus型飞行时间质谱测定仪，设定条件：m/z为2000-40000Da，氮气激光脉冲仪λ为337nm，脉冲宽度3ns，频率10Hz，平均不同位置发射500下激光脉冲，正线性模式。

9.根据权利要求1所述的利用飞行时间质谱鉴别蓝藻细胞的方法，其特征在于，步骤(3)中，将所测图谱选取范围为m/z 6000-12000Da，对实际检测到的峰值，与13个特征核糖体蛋白L32，S21，L33，L35，S18，L29，L31，L28，S16，S19，S15，S20以及S14的理论峰值进行比对后鉴别是否是铜绿微囊藻，同时确定具体株型。