[发明专利]基于氧化石墨烯的核酸结合蛋白提取方法有效
| 申请号: | 201710223110.8 | 申请日: | 2017-04-07 |
| 公开(公告)号: | CN106928315B | 公开(公告)日: | 2020-09-25 |
| 发明(设计)人: | 肖华;尚志;曹成喜;樊柳荫;张岩 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学 |
| 主分类号: | C07K1/14 | 分类号: | C07K1/14 |
| 代理公司: | 上海交达专利事务所 31201 | 代理人: | 王毓理;王锡麟 |
| 地址: | 200240 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 基于 氧化 石墨 核酸 结合 蛋白 提取 方法 | ||
1.一种基于氧化石墨烯的核酸结合蛋白提取方法,其特征在于,通过将待测细胞加入含有小于500nm的用于吸附核酸的氧化石墨烯的细胞裂解液中进行裂解,离心收集裂解后得到的氧化石墨烯-核酸-核酸结合蛋白复合物并将其重悬于蛋白变性液中并超声处理,收集上清液中的核酸结合蛋白即得;
所述的细胞裂解液,具体为:每裂解5x106个细胞,溶解500μg氧化石墨烯于500μL 250mMSDS中;
所述的离心收集是指:用移液器吸头缓慢搅拌充分裂解细胞,离心收集裂解后得到的氧化石墨烯-核酸-核酸结合蛋白复合物,超纯水洗复合物3次。
2.根据权利要求1所述的核酸结合蛋白提取方法,其特征是,所述的待测细胞为所有动物细胞。
3.根据权利要求1或2所述的核酸结合蛋白提取方法,其特征是,所述的待测细胞重悬于PBS中为5x106个细胞重悬于20μL PBS。
4.根据权利要求1所述的核酸结合蛋白提取方法,其特征是,所述的超纯水洗是指:在1.5mL EP管中用超纯水重悬复合物并上下颠倒清洗,不打散复合物。
5.根据权利要求1所述的核酸结合蛋白提取方法,其特征是,将复合物重悬于蛋白变性液中并超声处理中,蛋白变性液为6~8M尿素,10~100mM Tris-HCl,pH 7.0~8.0。
6.根据权利要求5所述的核酸结合蛋白提取方法,其特征是,所述的超声处理的条件为:200~400W超声6~10s。
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