[发明专利]一种快速构建扩增子文库的融合引物组合

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物检测领域，特别涉及一种快速构建扩增子文库的融合引物组合。

背景技术

下一代测序(next-generation sequencing，NGS)由于高通量、高灵敏度、高度自动化等特性，近年来在疾病的研究和诊断治疗中越来越多地被应用。NGS技术能实现多基因平行检测，比传统检测方法节省样本，且灵敏度更高，能更真实还原肿瘤变异全景。但Life NGS平台中传统的构建扩增子文库的方法步骤繁琐，需要经过PCR扩增、消化、加接头、纯化等步骤，需要花费约5h；并且由于多步骤操作中需要开盖，因此文库易被污染，文库损失率高；另外在传统的构建扩增子文库的方法中，单个样品建立文库的成本较高，为200-1000元/例。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速构建扩增子文库的融合引物组合。使用该融合引物组合可以简便、快速的经1步PCR构建扩增子文库，且由于在PCR起始时就引入barcode，使得样本及文库间交叉污染的可能性大大降低，并能简化实验场地分区的要求，该融合引物组合还能将单个样品建立文库的成本控制在30元/例。

为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：

一种用于构建DNA样品的扩增子文库的融合引物组合，包括：根据目标扩增子设计的上游融合引物和根据目标扩增子设计的下游融合引物，其中：

所述根据目标扩增子设计的上游融合引物包括按照5’到3’的方向依次排列的第一接头序列(A序列)、barcode序列、第二接头序列和根据目标扩增子设计的特异性上游引物序列；

所述根据目标扩增子设计的下游融合引物包括按照5’到3’的方向依次排列的第三接头序列(trP1序列)和根据目标扩增子设计的特异性下游引物序列。

上述用于构建DNA样品的扩增子文库的融合引物组合在另一种实施方式中，所述第一接头序列包括SEQ ID:1序列，SEQ ID:1序列的核苷酸序列为CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAG。

上述用于构建DNA样品的扩增子文库的融合引物组合在另一种实施方式中，用于构建同一个DNA样品的扩增子文库的融合引物组合中，上游融合引物中的barcode序列相同；用于构建不同DNA样品的扩增子文库的融合引物组合中，上游融合引物中的barcode序列不同。

上述用于构建DNA样品的扩增子文库的融合引物组合在另一种实施方式中，所述第二接头序列包括核苷酸序列GAT。

上述用于构建DNA样品的扩增子文库的融合引物组合在另一种实施方式中，所述第三接头序列包括SEQ ID:2序列，SEQ ID:2序列的核苷酸序列为CCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT。

上述用于构建DNA样品的扩增子文库的融合引物组合在另一种实施方式中，根据任意一种目标扩增子设计的上游融合引物和根据任意一种目标扩增子设计的下游融合引物的浓度均为100μM。

上述用于构建DNA样品的扩增子文库的融合引物组合在另一种实施方式中，当同一个PCR反应中的目标扩增子的数量＞1时，所述根据目标扩增子设计的上游融合引物为根据每一种目标扩增子设计的上游融合引物的组合，所述根据目标扩增子设计的下游融合引物为根据每一种目标扩增子设计的下游融合引物的组合。

上述用于构建DNA样品的扩增子文库的融合引物组合在另一种实施方式中，根据任意一种目标扩增子设计的上游融合引物和根据该目标扩增子设计的下游融合引物的摩尔比为1:1。

上述用于构建DNA样品的扩增子文库的融合引物组合在另一种实施方式中，所述DNA样品为基因组DNA。

上述用于构建DNA样品的扩增子文库的融合引物组合在另一种实施方式中，基因组DNA提取自组织样本或福尔马林固定石蜡包埋样本。

上述用于构建DNA样品的扩增子文库的融合引物组合在另一种实施方式中，所述目标扩增子包括选自下组22种目标扩增子中的至少一个：