[发明专利]盐酸利托君的合成方法

权利要求书

1.一种盐酸利托君的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：以式Ⅱ化合物对氯苯甲醛和式Ⅲ化合物丙酮酸为底物与缓冲溶液构成反应体系，添加催化剂和添加剂，反应，纯化，得到式Ⅳ化合物(R)-1-(4-氯苯基)-1-羟基丙烷-2-酮，所述添加剂为MgCl₂；

步骤2：以式Ⅳ化合物(R)-1-(4-氯苯基)-1-羟基丙烷-2-酮和甲酸铵为底物，与缓冲溶液构成反应体系，添加催化剂，反应，纯化，得到式Ⅴ化合物(1R,2S)-2-氨基-1-(4-氯苯基)-1-丙醇；

步骤3：式Ⅴ化合物(1R,2S)-2-氨基-1-(4-氯苯基)-1-丙醇和LiOH·H₂O在催化剂的作用下于溶剂中反应，生成式Ⅵ化合物4-((1R,2S)-2-氨基-1-羟丙基)苯酚；

步骤4：式Ⅵ化合物4-((1R,2S)-2-氨基-1-羟丙基)苯酚与式Ⅶ化合物在缚酸剂和催化剂的作用下于溶剂中反应生成式Ⅰ化合物盐酸利托君，

反应式如下：

其中，X选自Cl，Br，I；

所述步骤1中，所述催化剂为来源于Zymomonas mobilis的苯丙酮合成酶的基因工程菌全细胞及辅酶硫胺素焦磷酸,来源于Zymomonas mobilis的苯丙酮合成酶的基因工程菌中外源苯丙酮合成酶的编码基因是序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

所述步骤2中，所述催化剂为来源于Saccharomyces cerevisiae的亮氨酸脱氢酶基因工程菌全细胞破碎酶液、来源于Candida boidinii的甲酸脱氢酶的基因工程菌全细胞破碎酶液及辅酶，辅酶为NAD+，来源于Saccharomyces cerevisiae的亮氨酸脱氢酶的基因工程菌中外源亮氨酸脱氢酶的编码基因是序列表中SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；来源于Candida boidinii的甲酸脱氢酶的基因工程菌中外源甲酸脱氢酶的编码基因是序列表中SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列；

所述步骤3中，所述催化剂为乙酰丙酮酸铜和双(4-羟基-2,6-二甲基苯基)草酸酰胺。

2.根据权利要求1所述的盐酸利托君的合成方法，其特征在于，所述步骤1中，所述缓冲溶液选自磷酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、Tri-HCl缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲溶液、MOPS缓冲溶液中的一种。

3.根据权利要求2所述的盐酸利托君的合成方法，其特征在于，所述步骤1中，控制来源于Zymomonas mobilis的苯丙酮合成酶的基因工程菌全细胞的浓度为80-120g/L；控制辅酶硫胺素焦磷酸的浓度为1-3mM；控制MgCl₂的浓度为4-7mM。

4.根据权利要求3所述的盐酸利托君的合成方法，其特征在于，所述步骤2中，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液或柠檬酸盐缓冲溶液，控制反应体系pH为5.5-8。

5.根据权利要求4所述的盐酸利托君的合成方法，其特征在于，所述步骤2中，控制来源于Saccharomyces cerevisiae的亮氨酸脱氢酶的基因工程菌细胞破碎酶液浓度为10-12g/L，控制来源于Candida boidinii甲酸盐脱氢酶的基因工程菌细胞破碎酶液浓度为30-70g/L，控制辅酶NAD+的浓度为0.1-0.5g/L。

6.根据权利要求5所述的盐酸利托君的合成方法，其特征在于，所述步骤3中，所述溶剂为DMSO或DMA或NMP和水的混合溶液。