[发明专利]乙型肝炎病毒抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫学和感染病学领域，涉及多种乙型肝炎病毒的抗原表位肽序列。

背景技术

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是最常见感染性疾病之一，严重危及人类的健康。世界卫生组织2015年7月统计数据显示，预计全球1/3的人口感染过HBV，约2.48亿HBV携带者，后期可发展为肝硬化和原发性肝细胞癌。每年约78万HBV感染的患者因疾病进展为肝硬化、肝衰竭或是肝癌而导致死亡。流行病学调查显示在中国大陆地区约8亿人感染过HBV，乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)携带率高达10.34％，即我国目前约有1.2亿人为HBV携带者，占全球慢性感染人数的一半。另外，我国也是一个肝癌大国，约占全球肝癌人数的55％以上。

HBV基因组由不完全双链环状DNA组成，长的为负链，含3020-3320个碱基，短的为正链，含1700-2800个碱基。包括四个开放阅读框(ORF)，分别称为C、X、P和S编码区。C区由pre-C和C基因组成，分别由不同的起始密码子调控，在相同的终止密码子处结束，pre-C和C基因共同编码pre-C蛋白，Pre-C蛋白再经过切割加工后形成核心抗原(HBeAg)。S区由S基因、PreS1和PreS2基因组成，由3个不同的起始密码子启动翻译，在同一个终止密码子处终止翻译，分别编码表面抗原(HBsAg)蛋白、PreS1蛋白和PreS2蛋白。P区基因编码的HBV的聚合酶蛋白(HBpol)。X区的基因编码X蛋白(HBx)，包含154个氨基酸，是最小的一个开放阅读框。

细胞毒性T细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)是介导适应性免疫应答的核心细胞，在抗感染、抗肿瘤以及超敏反应和自身免疫病的发生中起着至关重要的作用，其细胞膜上的T细胞受体(T cell receptor,TCR)能够特异性识别并结合抗原递呈细胞表面MHC I类分子与抗原肽的复合物，即MHC/抗原肽复合体分子。CTL表位是指与MHC I类分子结合的抗原肽，是抗原分子中能被TCR特异性识别的线性片段或空间构象性结构，是引起免疫应答反应的基本抗原单位，在CTL活化过程中扮演着关键角色。

MHC系统指主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)，是脊椎动物基因组中一组紧密连锁的基因群，编码表达MHC I类和II类蛋白分子。HLA(human leukocyte antigen)是人类的MHC系统，是人体最复杂的基因群，在人群中具有高度多态性。HLA在抗原识别、抗原呈递等机体免疫过程中发挥重要作用，是影响人体免疫反应的主要因素。HLAI类分子主要负责将内源性HBV抗原呈递给CD8⁺CTL，活化的CTLs通过分泌穿孔素和颗粒酶等使病毒感染的肝细胞凋亡，同时分泌特定的细胞因子抑制HBV的复制。因此，动态监测HBV抗原特异性CD8⁺T细胞的数量和功能可以准确反映乙肝感染者针对HBV的特异性免疫功能状态。由于不同人的HLA分子型别不同，其对HBV不同抗原的加工、处理和提呈能力也不相同，从而引起不同程度的HBV抗原特异性免疫应答反应。根据乙肝患者不同的HLA分子型别，选择其所提呈的HBV特异性抗原肽，动态监测该HBV抗原肽特异性的CD8⁺T细胞的数量和功能，对HBV感染者的疾病进程监测、诊断与治疗方案的制定、疗效观察和预后转归的判断等都有重要意义，是实现乙肝精准医学治疗的重要技术手段。同时，利用这些HLA-A分子高亲和力结合的HBV特异性抗原肽，还可以制备多肽疫苗或基因疫苗，预防和治疗HBV感染。

目前，国内外报道的与HLA-A分子呈高亲和力结合的HBV特异性抗原肽中，HLA-A*0201、A*0203、A*0206、A*1101和A*2402等分子限制性的抗原肽序列被报道和鉴定的较多。而中国人群中频率相对较高的HLA-A*0101、A*0301、A*3001、A*3101、A*3201、A*3303和A*6801等分子的限制性HBV抗原肽则较少报道。本专利通过生物信息学方法，利用六种在线表位预测数据库对HLA-A等位基因型限制的HBV特异性抗原表位肽进行预测，获得一组分别与HLA-A*0101、A*0301、A*3001、A*3101、A*3201、A*3303和A*6801等HLA-A分子呈高亲和力结合的HBV特异性抗原肽序列，为制备HBV感染的治疗和预防性疫苗以及检测HBV抗原特异性T细胞的试剂等提供候选抗原表位肽。

发明内容