[发明专利]一种抗多重耐药葡萄球菌感染药物RIP1183的制备方法

说明书

一种抗多重耐药葡萄球菌感染药物RIP1183的制备方法，以RinkAmideMBHAResin、MBHA Resin、Rink Amide‑AM Resin以上树脂中的任何一种为起始原料，按照固相合成的方法，通过制备Fmoe‑Phe‑MBHAResin、制备Fmoc‑Asn（Trt）‑Phe‑MBHAResin和制备Fmoc‑Thr（tBu）‑Asn（Trt）‑Phe‑MBHAResin等步骤，制备出粗品并纯化，获得所需的RIP1183纯品。本发明制备方法具有以下特点：工艺稳定，质量可控，产品纯度高，可规模化生产。

技术领域

本发明属于生物技术领域发明，涉及抗多重耐药葡萄球菌感染药物多肽RIP1183的制备方法，尤其适用于规模化生产。

背景技术

RNAIII抑制肽(RNAIII inhibiting pepnde，缩写RIP)是近年来发现的葡萄球菌群体感应机制的有效抑制剂，可以阻断葡萄球菌细胞间的信号传导通路，从而抑制葡萄球菌的生物被膜形成，防止葡萄球菌感染。天然的RNAIII抑制肽由凝固酶阴性葡萄球菌菌株产生，而人工制备该类多肽多采用固态合成方法。但是，以往的制备方法存在很多缺点，如工艺不稳定，收率较低，质量可控性较差，产品纯度不高，生产周期长，不利于工业化生产；制备过程中使用氟化氢，对环境造成严重污染等。申请人在实验室采用新的固态合成方法，自主合成了具有抗多重耐药葡萄球菌感染作用的RNAIII抑制肽，命名为RIP1183。

发明内容

本发明的目的是利用多肽固相合成和纯化技术，建立一种RNAIII抑制肽RIP1183的制备方法，为RNAIII抑制肽的大规模应用提供原料保障。

本发明的目的是这样实现的：一种抗多重耐药葡萄球菌感染药物RIP1183的制备方法，RIP1183是由7个氨基酸组成的多肽，其化学名称：乙酰-L-酪氨酰-L-赖氨酰-L-脯氨酰-L-缬胺酰-L-苏氨酰-L-谷氨酰胺-L-苯丙酰胺；化学结构：Ac-Tyr-Lys-Pro-Val-Thr-Asn-Phe-NH₂

其特征在于：制备抗多重耐葡萄球菌感染药物RIP1183的方法，包括RIP1183的固相合成和纯化方法，合成的主要原料为合成树脂和前述7种含有芴甲氧羰酰基(Fmoc-)保护基团氨基酸；制备RIP1183方法包括如下基本步骤：

(1)以Rink Amide MBHA Resin、MBHA Resin、Rink Amide-AM Resin其中的任何一种树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有芴甲氧羰酰基保护的氨基酸；

(2)依次脱去合成用氨基酸上的芴甲氧羰酰基保护基团，用DIEA/HOBt、DIEA/HOAt、TBTU/HOBt、TBTU/HOAt、HBTU/HOBt、HBTU/HOAt、HATU/HOBt、HATU/HOAt或HCTU中的一种为缩合剂进行接肽反应，获得保护的树脂；

(3)同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得粗品；

(4)任选经C₁₈或C₈色谱柱进行分离纯化，获得RIP1183。

本发明的目的还可以这样实现：进行接肽反应，获得保护的树脂的方法为：

(1)制备Fmoc-Phe--树脂：

以Rink Amide MBHA Resin树脂，用N,N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷浸泡溶胀，加入脱帽试剂脱帽(脱去氨基酸上的保护基团，此处为Fmoc-)，用真空泵抽干，重新加入脱帽试剂脱帽，抽干，用异丙醇洗涤2次，DMF洗涤2次，茚三酮检测呈阳性，抽干，再加入用DMF溶解的Fmoc-Phe-OH及缩合剂进行接肽反应，洗涤树脂获得Fmoc-Phe-树脂；

树脂的重量体积浓度为5-20ml/g；

缩合剂的摩尔数为树脂的2～20倍；