[发明专利]柯萨奇病毒A6型感染动物模型及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中，柯萨奇病毒A6型感染动物模型及其制备方法与应用。

背景技术

柯萨奇病毒(Coxsackievirus，CV)为单股正链RNA病毒，属于小RNA病毒科，肠道病毒属。柯萨奇病毒颗粒为二十面体立体对称，呈球形，直径约23～33nm，核衣壳裸露，无包膜和突起；柯萨奇病毒基因组只包含一个开放阅读框架(ORF)，编码一个较长的多聚蛋白前体。该ORF依次分为P1、P2和P3 3个区，其中P1区编码病毒的结构蛋白VP1～VP4，组成病毒衣壳。P2和P3区编码非结构蛋白。

柯萨奇病毒是引起儿童手足口病(HFMD)的主要病原体，尤其是3岁以内的婴幼儿，能够导致其严重的神经系统并发症。引起HFMD的肠道病毒(EVs)主要包括四种类型：EV-A、EV-B、EV-C和EV-D。柯萨奇病毒A6型(CVA6)属于肠道病毒A组，共16个亚型，其中亚型A组11个和B组5个。根据基因型的不同，CVA6划分为A～E五个分支，E基因型又分为E1和E2基因亚型。自2008年CVA6首次爆发于芬兰以来，E2亚型成为世界范围内流行的主要基因型。临床数据表明，相比经典的HFMD病例，E2亚型CVA6感染人后往往会导致更严重的呼吸系统和神经系统疾病。更重要的是，该病毒感染会导致严重的疱疹性咽峡炎，甚至引起新生儿的死亡。同时，该亚型病毒在流行季节很容易跟其它型肠道病毒混合感染，给疾病的治疗和诊断带来很多困难。

在2010年之前，HFMD主要由EV71和CA16两种类型肠道病毒引起，关于CVA6的报道非常少。近几年，CVA6在全世界范围内流行，尤其是泛太平洋地区，包括中国台湾、新加坡、日本和泰国等，很多地区CVA6已取代EV71和CA16成为导致HFMD的主要流行株。自2011至2015年，欧洲和北美等其它国家和地区流行的肠道病毒也是CVA6。目前，在中国大陆的很多城市CVA6呈现爆发式流行，比如深圳、上海和青岛等地，其发病率和死亡率逐年升高。所以，E2型CVA6已逐渐成为在全世界范围内流行且能导致严重并发症的HFMD病原体。

由于其它型肠道病毒(非EV71和非CA16)所引起的临床表现轻微，致病性较弱，并未引起人们对CVA6的关注。最近的报告表明，近期流行的E2型CVA6感染会导致严重的中枢神经系统(CNS)急性并发症，如无菌性脑膜炎、脑干脑炎、和急性弛缓性麻痹等。目前关于手足口病的发病机制还不清楚，特别是CVA6的致病机理尚未报道，筛选抗CVA6药物和疫苗缺乏稳定的动物感染模型，抗CVA6药物和疫苗的开发也受到制约，究其原因缺乏一合适的CVA6感染动物模型。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何治疗和/或预防柯萨奇病毒A6型所致疾病。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种柯萨奇病毒A6型感染动物模型的制备方法。

本发明所提供的柯萨奇病毒A6型感染动物模型的制备方法，包括：将柯萨奇病毒A6型毒株感染动物，得到柯萨奇病毒A6型感染动物模型；

所述柯萨奇病毒A6型毒株可为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.13393的毒株，该毒株的名称为WF057R。

上述方法中，所述动物可为哺乳动物。所述哺乳动物具体可为小鼠。所述小鼠具体可为ICR小鼠。

上述方法中，所述动物可为3-5日龄动物。

上述方法中，所述柯萨奇病毒A6型毒株感染所述动物的量可为10^5.5TCID₅₀/(3.5-4.5g)。所述柯萨奇病毒A6型毒株感染所述动物的量具体可为10^5.5TCID₅₀/4g。

上述方法中，所述将柯萨奇病毒A6型毒株感染动物可通过注射的方式进行。所述注射可为肌肉注射或腹腔注射。

为解决上述技术问题，本发明还提供了利用所述方法制备的柯萨奇病毒A6型感染动物模型在筛选抗柯萨奇病毒A6型药物和/或疫苗中的应用。

本发明筛选了一株具有代表性的CVA6毒株WF057R，利用本发明的CVA6毒株WF057R还可以构建稳定且重复性好的柯萨奇病毒A6型感染动物模型，该模型可为下一步进行药物的抗病毒治疗和评估病毒灭活疫苗的免疫保护效果提供研究工具。

生物材料保藏说明

生物材料的分类命名：柯萨奇病毒A6型(Coxsackievirus)