[发明专利]一种制备蜂毒肽的方法

权利要求书

1.一种制备蜂毒肽的方法，步骤如下：

①蜂毒的除杂

将粗蜂毒加入到pH为4.0-5.5的缓冲溶液中，使其浓度为0.5-1.5mg/mL，以2500-3500r/min离心3-7min去除不溶性的杂质，得上清液；

②蜂毒肽的分离

将①中所得上清液过葡聚糖凝胶G-25柱，用蒸馏水洗脱，流速控制在25-30mL/h，测定各分离组分的分子量，在葡聚糖凝胶柱下收集分子量为2840Da的层析组分经冷冻干燥得固体样品；

③蜂毒肽的纯化

将②中冷冻干燥所得的固体用2-4倍体积的无水乙醇进行溶解，经2500-3500r/min离心4-6min，沉淀物质即为蜂毒肽。

2.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，粗蜂毒是将蜜蜂蛰刺排出的毒液用蒸馏水溶解，经冷冻干燥所得。

3.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲溶液。

4.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，除杂为除去不溶于缓冲溶液的物质。

5.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示，G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围，25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克。

6.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相，流动相与固定相作用力比样品弱，样品各组分按先后顺序从固定相洗出。

7.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T(min)与其相对分子质量对数值(lgMr)标准曲线回归方程，标准品为抗菌肽标准品（Mr =1422Da）、氧化性谷胱甘肽标准品(Mr =612Da)、还原性谷胱甘肽标准品(Mr =307.32Da)。

8.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，Da为蜂毒肽分子量的单位。

9.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，冷冻干燥为将所得组分冷冻至水的冰点以下，并置于高真空(10-40Pa)的容器中，通过供热使物料中的水分直接从固态冰升华为水汽的一种干燥方法。

10.如权利要求1所述的制备蜂毒肽的方法，沉淀为不溶于无水乙醇的固体物质。