[发明专利]一种人间充质干细胞冻干粉的制备方法

说明书

本发明提出一种人间充质干细胞冻干粉的制备方法，解决了现有技术中细胞冷冻技术存在的细胞毒副效应、异源血清可能导致过敏和排斥反应、冷冻后无活的干细胞以及干细胞中的活性成分不能完好保留的问题，一种人间充质干细胞冻干粉的制备方法，包括以下步骤：1)收集；2)间充质干细胞的培养；3)间充质干细胞的冻存；4)冻干粉的制备；5)添加复活液；本发明所制备的冻干粉在加复活液后能够快速溶解并使60％以上的干细胞复活，还能有效地保存人间充质干细胞中的各种具有生物活性的细胞因子和干细胞膜等特殊成分，从而有效地解决了干细胞活性成分的保存期有限这一瓶颈。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，特别是指一种人间充质干细胞冻干粉的制备方法。

背景技术

至今世界上用于人体疾患治疗和美容的干细胞主要为造血干细胞和间充质干细胞，后者主要来源于胎盘/脐带、骨髓和脂肪组织。间充质干细胞最初在骨髓中发现，间充质干细胞凭借其高度的自我更新和多向分化潜能，易于分离培养和扩增，无致瘤性及伦理道德问题，易于外源基因转染和表达，易于获得、移植且可避免排斥反应等诸多优势，逐渐成为干细胞研究领域的焦点，并具有重要的研究和应用前景，特别在细胞治疗和基因治疗中有重要的临床应用价值。

间充质干细胞在体内外能够大量扩增，在特定的诱导环境下，可分化为皮肤、脂肪、毛发、骨骼、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝脏、心肌和内皮等多种组织细胞。从而可用来唤醒休眠的内源性干细胞和功能细胞，修复受损的细胞，替换衰老的细胞和增补死亡和缺失的细胞。连续不断地传代培养可导致干细胞发生不同程度的分化和老化，降低他们的优势，这些弱点已构成了大规模生产、保存和临床使用的重大挑战。其二，间充质干细胞可以合成和分泌大量的细胞因子如细胞生长因子，血管诱导因子，免疫调节因子，炎性损伤因子等，从而来重塑皮肤的质地和外观，增强肌力和体力，恢复智力和记忆，调节细胞的代谢和功能。同样，衰老的间充质干细胞不但增殖分化能力下降，而且也会引起不同程度的副反应如炎症反应、促瘤生长、易发生凋亡等。为了发扬间充质干细胞的优势和避免其可能的劣势，我们通常采用低传代的间充质干细胞来作为应用的对象，绝对避免使用衰老和病变的干细胞。大量的研究表明这些低传代的成体干细胞可用于抗衰老、治未病、防止和修复病变引起的组织器官损伤。近年来干细胞在美容整形等领域应用广泛：自体间充质干细胞在美容中最早应用在整形外科中，如用于去疤痕、填皱纹、增肤质、祛色斑、修损伤、抗衰老和丰胸等，它已成为应用较多的一种干细胞美容技术。而传统上所谓的干细胞美容术，一般都是直接注射干细胞针剂。这种注射用干细胞的来源主要是异体的胎盘/脐带或自体的脂肪/皮肤干细胞，但是这些干细胞的获取纯化、培养扩增、冻存运输和注射应用都需要一系列昂贵的仪器设备、苛刻的GMP洁净条件和熟练的专业技术人员。此外，操作流程和工艺非常复杂，不宜长期保存和快速运输，这就大大阻碍了干细胞的产业化和相关产品的推广和使用。

目前怎样高效地冻存、干燥和复苏大量的间充质干细胞也面临着许多技术问题。如常规细胞冻存液含有DMSO和异种血清，对细胞有毒，可引起过敏和可能排斥反应，不利于干细胞在美容和医疗等方面的推广应用。其二鲜活的干细胞由于操作复杂、数量小，耗时长，运送使用受限，也不利于干细胞在美容和医疗等方面的推广应用。再者常规的含血清的干细胞培养液易引起细胞的分化和老化，不能保障大规模干细胞培养的质量，也不利于干细胞在美容和医疗等方面的推广应用。最后，怎样复活冷冻的干细胞和保持其内在的活性成分也是急需解决的问题。

发明内容

本发明提出一种人间充质干细胞冻干粉的制备方法，解决了现有技术中细胞冷冻技术存在的细胞毒副效应、异源血清可能导致过敏和排斥反应、冷冻后无活的干细胞以及干细胞中的活性成分不能完好保留的问题。

本发明的技术方案是这样实现的，一种人间充质干细胞冻干粉的制备方法，包括以下步骤：

1)收集：收集传代数为2～8代之间的优质人间充质干细胞；

2)间充质干细胞的培养：用无血清的培养基扩增和传代人间充质干细胞；