[发明专利]一种人间充质干细胞冻干粉的制备方法

权利要求书

1.一种人间充质干细胞冻干粉的复苏方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）收集：收集传代数为2~8代之间的人间充质干细胞；

2）间充质干细胞的培养：用无血清的培养基扩增和传代人间充质干细胞；

3）间充质干细胞的冻存：使用细胞冻存保护液将传代人间充质干细胞冷冻至-80度；所述细胞冻存保护液包含活性成分物质及含量如下：

海藻糖0.1-10.0g / 100ml，右旋糖酐0.1-20.0g /100ml，多聚精氨酸0.1-10mg /100ml，甘露醇0.1-5.0g /100ml，羟乙基淀粉0.1-5.0g /100ml，泊洛沙姆0.1-5.0g /100ml，丙三醇0.1-10.0g /100ml，0.25 mol/L的蔗糖0.1-5.0g /100ml，聚乙烯吡咯烷酮0.1-5.0g /100ml，其余为注射用水和无血清的基础培养基；

4）冻干粉的制备：将步骤3）中处理后的人间充质干细胞制备成冻干粉；

步骤4）冻干粉的制备方法：a、在100级安全柜和GMP细胞培养间中消化、离心和清洗低传代数的人间充质干细胞； b、在100级安全柜中打开离心管，用无菌枪头吸出离心管中的清洗液，在0.75ml的脐带间充质干细胞培养液中加入0.25ml的特殊无DMSO和血清的冻存保护液，混匀移至一无菌的收集管中平衡20min，然后-80℃直接冻存； c、将-80℃冻存的干细胞保存液抽真空，升华干燥，除去冰晶，最后制得冻干粉，4℃保存；

5）添加复活液：向步骤4）制备的冻干粉中添加复活液；

复活液包含活性成分物质海藻糖、丙三醇、泊洛沙姆、维生素C，各活性成分物质及含量如下：

海藻糖0.1-10.0g / 100ml，丙三醇0.1-8g/ 100ml，泊洛沙姆0.1-5.0g /100ml，维生素C 0.01-0.1g/ 100ml，注射用水与冻干前的水含量相等。

2.如权利要求1所述的一种人间充质干细胞冻干粉的复苏方法，其特征在于：

所述无血清的基础培养基为DMEM 和F12 按溶液体积比1:1 的比例混合均匀而成。