[发明专利]高效产氢功能基因载体pET32a-fdhF及其构建和应用有效
| 申请号： | 201710163682.1 | 申请日： | 2017-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN106755044B | 公开（公告）日： | 2020-10-16 |
| 发明（设计）人： | 王海燕;程水源;刘伟;赵雅琪;徐岚婷;王冕超 | 申请（专利权）人： | 北京工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N1/21;C12P3/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京思海天达知识产权代理有限公司 11203 | 代理人： | 刘萍 |
| 地址： | 100124 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高效 功能 基因 载体 pet32a fdhf 及其 构建 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种基因载体 pET32a-fdhF 在大肠杆菌BL21产氢上的应用，其特征在于，将基因载体pET32a-fdhF 转化到大肠杆菌BL21中，在产氢培养基中培养此大肠杆菌生产氢气；所述基因载体为包含有蜡状芽孢杆菌甲酸脱氢酶 fdhF 基因的pET32a 质粒；建所述基因载体pET32a-fdhF 的方法，包括以下步骤：
(1)设计蜡状芽孢杆菌甲酸脱氢酶fdhF 基因的引物，并扩增蜡状芽孢杆菌甲酸脱氢酶fdhF 基因；蜡状芽孢杆菌甲酸脱氢酶fdhF基因如sequence No.3所示；
(2)回收甲酸脱氢酶fdhF 基因的基因片段，进行测序验证扩增基因的完整性；
(3)使用限制性内切酶NdeⅠ和XhoⅠ双酶切pET32a 载体，切胶回收，获得线性化载体；
(4)将准备好的线性化载体和fdhF 基因片段连接起来，得到含fdhF 基因片段的重组载体；
(5)将重组产物，转化DH5α感受态细菌，得到基因载体pET32a-fdhF。
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