[发明专利]一种蜂胶原胶中氯霉素残留量的测定方法

权利要求书

1.一种蜂胶原胶中氯霉素残留量的测定方法，采用叔丁基甲醚溶解蜂胶样品，先加氢氧化钠溶液去除黄酮类等杂质，醚层加正己烷降低氯霉素的溶解度，再用乙酸钠缓冲液反萃氯霉素，反萃溶液调成碱性后用乙酸乙酯萃取，氮气吹干浓缩后用水复溶解，液相色谱-串联质谱仪检测，内标法定量，其特征在于样品处理具体步骤为：称取样品1g，于离心管中，加20ng/mL氯霉素同位素内标标准工作液30μL，加叔丁基甲醚8mL，涡旋3min，使蜂胶充分溶解，加1％氢氧化钠溶液10mL，涡旋2min，8000r/min离心5min，上层叔丁基甲醚移入另一离心管，先加0.2mol/L乙酸钠溶液10mL，再加正己烷7mL，涡旋2min，4000r/min离心5min，下层乙酸钠溶液移入另一离心管，上层再加0.2mol/L乙酸钠溶液5mL反萃一次，4000r/min离心5min，合并两次乙酸钠溶液反萃液，用氨水调pH至10±0.2，加乙酸乙酯10mL，涡旋3min，4000r/min离心5min，上清液移入试管中，45℃氮吹浓缩至干；吹干的玻璃试管中加水1mL溶解待测化合物，旋涡2min，滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。

2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述内标法定量的标准曲线的制备方法为：精密量取20ng/mL氯霉素标准工作液和20ng/mL内标标准工作液适量，用水稀释，配制成氯霉素浓度为0、0.1、0.5、1.0、2.0和5.0μg/L，氘代氯霉素浓度为0.3μg/L的系列标准溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定；以氯霉素和氘代氯霉素的特征离子质量色谱峰面积比为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。

3.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述液相色谱的色谱条件为：色谱柱：Atlantis T₃，4.6mm×100mm，粒径3μm；流动相：体积比65％的甲醇－体积比35％的水；流速：0.3mL/min；柱温：40℃；进样量：20μL。

4.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的质谱仪的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测；喷雾电压：-4000V；雾化气：10；气帘气：10；碰撞气：10；辅助加热气温度：500℃；去集簇电压：-32V；聚焦电压：-75V；入口电压：-6V；碰撞池出口电压：-10V；驻留时间：0.1s；定性、定量离子对和碰撞能量：氯霉素的定性离子对为m/z 320.9>152.0和m/z 320.9>257.0，其中m/z 320.9>152.0为定量离子对，碰撞能量分别为-25V和-17V；氘代氯霉素的定性离子对和定量离子对为m/z 326.0/157.0，碰撞能量为-25V。

5.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的测定方法的定性方法为：通过样品色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液色谱峰的特征离子相对照定性；试料与标准品保留时间的相对偏差不大于5％；试料特征离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致；相对离子丰度大于50％时，容许偏差为±20％；相对离子丰度大于20％小于等于50％时，容许偏差为±25％；相对离子丰度大于10％小于等于20％时，容许偏差为±30％；相对离子丰度小于等于10％时，容许偏差为±50％；相对丰度偏差不超过以上允许偏差范围，则可判断试样中存在相应的被测物。

6.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的测定方法的定量方法为：取样品溶液和标准溶液，按内标法以峰面积比计算；标准溶液及试料溶液中的氯霉素和氘代氯霉素的响应值均应在仪器检测的线性范围之内；

标准曲线校准：由求得a和b，则

试料中氯霉素残留量按式(2)计算：

式中：

A_s————标准溶液中氯霉素的峰面积；

A'_is————标准溶液中内标氘代氯霉素的峰面积；

c_s————标准溶液中氯霉素的浓度，单位为纳克每毫升；

c'_is————标准溶液中内标氘代氯霉素的浓度，单位为纳克每毫升；

c————样品溶液中氯霉素的浓度，单位为纳克每毫升；

c_is————试料溶液中内标氘代氯霉素的浓度，单位为纳克每毫升；

A————样品中氯霉素的峰面积；

A_is————样品中内标氘代氯霉素的峰面积；

X————供试样品中氯霉素的残留量，单位为微克每千克；

V————溶解残余物的体积，单位为毫升；

m————供试样品质量，单位为克；

D————稀释倍数；

本公式中稀释倍数为2；计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。