[发明专利]一种用于EBV‑CTL细胞的体外培养试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及临床应用研究及生物技术领域，具体的说是一种用于获得人外周血中单个核细胞诱导成EBV-CTL(nasopharyngeal carcinoma EB virus-CTL)的体外培养试剂盒。

背景技术

据联合国卫生组织(WHO)的粗略估计，全世界的鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)患者，约80％在中国，常见于中国南部，尤以广东地区发病率较高(20-50/100 000)，鼻咽癌是值得注意和重视的肿瘤。由于鼻咽癌发病部位的特殊性，周围有许多重要危及器官，无法进行根治性手术，因此放、化疗成为鼻咽癌的首选治疗方法。随着放、化疗技术的不断进步，鼻咽癌治疗的近期疗效显著提高。但局部复发和远处转移仍为鼻咽癌治疗失败的主要原因。因此有必要寻找一些新的治疗手段。

以肿瘤的免疫治疗为主的肿瘤生物治疗是目前临床治疗恶性肿瘤继手术、放、化疗之后的第4种模式，它既可以独立地治疗肿瘤，又可与手术及放、化疗结合，具有疗效高、特异性强、副作用小等优点，尤其对于中晚期已经发生转移的恶性肿瘤而言，它具有独到的治疗作用，近年来越来越受到人们的关注。基于肿瘤特异性抗原的免疫治疗可以启动以肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应为主的抗肿瘤效应，有效打击肿瘤，防止转移复发且不伤及无关组织。因其抗肿瘤特异性和免疫记忆性是其它方法所不能比拟的，故在肿瘤综合治疗中显示出很好的应用前景。随着对免疫应答机制的深入研究，人们已经意识到启动免疫应答程序的并不是整个抗原分子，而是与MHC分子结合的氨基酸短肽，即CTL表位，因此寻找特异性肿瘤抗原及其相应的CTL表位成为肿瘤免疫治疗的关键。

细胞毒T淋巴细胞(CTL)是目前研究较多的免疫活性细胞，用表达于肿瘤细胞表面的肿瘤抗原的CTL表位肽刺激机体，可以产生抗原特异性的CTL细胞，从而参与肿瘤免疫应答，其机理在于用CTL表位肽刺激机体后，可引起抗原特异性的CTL细胞的克隆增殖，而CD8+的CTL是目前认为抗肿瘤免疫的主要效应细胞，其向胞外释放穿孔素、细胞溶解素等物质或通过细胞表面的死亡受体(肿瘤坏死因子受体家族的成员，包括FAS)等溶解(即杀灭)靶细胞，同时亦可分泌IFN-γ等细胞因子间接杀伤肿瘤细胞，为杀伤肿瘤创造一个良好的微环境。体内的初始T淋巴细胞，经过肿瘤抗原刺激后可分化为效应性T细胞即CTL细胞，杀伤肿瘤，其中一部分效应T淋巴细胞可分化为效应型记忆T淋巴细胞，这种记忆性T淋巴细胞对肿瘤相关性抗原再次刺激后可表现出强烈有效的免疫应答，从而发挥杀伤功效，这也是临床应用CTL抗原肽杀伤肿瘤的一个理论基础。因此应用基于肿瘤抗原的CTL表位肽直接诱导特异性CTL抗肿瘤应答，已经成为一种方便有效的方法。

鼻咽癌常见的病理类型是未分化非角化性癌，这一类型的鼻咽癌与EB病毒(Epstein—Barr virus EBV)的感染有关，NPC患者90％以上有EBV感染。因而，针对EBV特异性多克隆CTL研究成为目前的研究热点。Comoli等在Ⅰ期临床研究(入组10例鼻咽癌患者)中证实CTL治疗鼻咽癌的安全性。Straathof等报告用EBV特异性多克隆CTL治疗6例复发的鼻咽癌患者，2例完全缓解、2例部分缓解、1例稳定、1例进展，有5例患者治疗后外周血EBV拷贝数明显降低，患者在输注EBV特异性多克隆CTL后没有明显毒副作用。Comoli等用EBV特异性CTL治疗10例难治性鼻咽癌患者(Ⅳ期)，治疗后所有患者的外周血均检测出EBV特异性CTL，治疗结果：部分缓解(PR)2例、稳定(SD)4例、进展(PD)4例。

综上所述，用基于肿瘤抗原的CTL表位肽直接诱导EBV特异性CTL的方法，是有效并安全的。急需寻找EBV相应的CTL表位肽，建立高效的EBV-CTL细胞体外培养方法，同时也更有必要设计与之相符的规范的试剂盒来保证培养方法的及时、准确、顺利进行。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于处理人外周血中单个核细胞EBV-CTL(nasopharyngeal carcinoma EB virus-CTL)体外培养的试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种用于EBV-CTL细胞的体外培养试剂盒，包括以下组分：

诱导CTL细胞分化的EBV抗原肽包被瓶；

诱导T细胞分化的包被瓶；

使T细胞携带相关抗原刺激EBV-CTL细胞增殖的因子；

和，刺激CTL、T细胞分裂增殖的细胞因子。