[发明专利]一种用于EBV‑CTL细胞的体外培养试剂盒

权利要求书

1.一种用于EBV-CTL细胞的体外培养试剂盒，其特征在于：包括以下组分：

诱导CTL细胞分化的EBV抗原肽包被瓶；

诱导T细胞分化的包被瓶；

使T细胞携带相关抗原刺激EBV-CTL细胞增殖的因子；

和，刺激CTL、T细胞分裂增殖的细胞因子。

2.按权利要求1所述的用于EBV-CTL细胞的体外培养试剂盒，其特征在于：所述体外培养试剂盒包括无血清培养基、分选细胞的细胞分选液和防止细胞聚集的细胞分散剂，防止细胞聚集的细胞分散剂为20％的人血清白蛋白。

3.按权利要求1所述的用于EBV-CTL细胞的体外培养试剂盒，其特征在于：

所述诱导CTL细胞分化的包被瓶为经EBV抗原肽、CD137单克隆抗体、γ干扰素、白细胞介素15包被的包被瓶；

所述诱导T细胞分化的包被瓶为经抗CD3单克隆抗体、植物凝集素、白细胞介素21包被的包被瓶。

4.按权利要求1或3所述的用于EBV-CTL细胞的体外培养试剂盒，其特征在于：所述诱导CTL细胞分化的包被瓶为将EBV抗原肽、CD137单克隆抗体、γ干扰素、白细胞介素15充分溶解于磷酸盐缓冲液中得混合包被溶液，将所得包被溶液浸润整个培养瓶的底面；浸润后于4℃静置12-24小时，而后将经EBV抗原肽、CD137单克隆抗体、γ干扰素、白细胞介素15包被的培养瓶于冻干机器内处理，待用；其中，混合包被溶液中EBV抗原肽浓度为120-135ng/mL、CD137单克隆抗体浓度为80-90ng/mL、γ干扰素浓度为0.2-0.25万单位/mL、白细胞介素15浓度为40-45ng/mL；

所述诱导T细胞分化的包被瓶为将抗CD3单克隆抗体、植物凝集素、白细胞介素21充分溶解于磷酸盐缓冲液中得混合包被溶液，将所得包被溶液浸润整个培养瓶的底面。浸润后于4℃静置12-24小时，而后将经包被抗CD3单克隆抗体、植物凝集素、白细胞介素21的培养瓶于冻干机内处理，待用；其中，混合包被溶液中抗CD3单克隆抗体浓度为200-220ng/mL、植物凝集素浓度为40-45μg/mL、白细胞介素21浓度为100-110ng/mL。

5.按权利要求1所述的用于EBV-CTL细胞的体外培养试剂盒，其特征在于：所述刺激CTL、T细胞分裂增殖的细胞因子为刺激CTL、T细胞分裂增殖的细胞因子1、细胞因子2和细胞因子4，其中，细胞因子1的成分为50万单位的IL-2，细胞因子2的成分为50万单位的IL-2，细胞因子4的成分为200万单位的IL-2；使T细胞携带相关抗原刺激细胞增殖因子为使T细胞携带相关抗原刺激EBV-CTL细胞增殖和成熟的细胞因子3，其中，细胞因子3为60ng的EBV抗原肽。

6.一种利用权利要求1所述的用于EBV-CTL细胞的体外培养试剂盒进行体外培养的方法，其特征在于：将待培养细胞于所述试剂盒内细胞分选液内对T淋巴细胞进行定向分选：而后对CTL细胞及T淋巴细胞进行诱导、分化、培养；培养后经试剂盒内细胞因子而后对CTL细胞及T淋巴细胞进行扩增，扩增后再对特异性EBV-CTL细胞进行扩增，进而实现EBV-CTL细胞的体外培养。