[发明专利]一种区分猪链球菌爆发菌株和散发菌株的检测引物和应用

说明书

本发明公开了一种区分猪链球菌爆发菌株和散发菌株的检测引物和应用，所述的引物为：SS‑F：TAACTGATACGCTTGGAT和SS‑R：AGATTCCGCATTTCCTCC。该引物能快速区分食品原料、食品、人或动物携带的猪链球菌中的爆发菌株和散发菌株。本发明通过基因组学和大数据分析方法对检测靶点进行了高通量筛选，在检测靶点的选择上进行了创新，极大提高了检测的准确性。方法简单易行，灵敏度高，反应时间短，成本低。

技术领域

本发明属于食品安全检测或者病原微生物检测领域，更具体涉及一种区分猪链球菌爆发菌株和散发菌株的检测引物和应用，本发明提供的引物适用于动植物性产品、制品、公共安全和动物疫病的快速检测。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一种重要的人畜共患传染病病原。S.suis不仅导致猪出现脑膜炎、关节炎、肺炎、心内膜炎和败血症等症状，造成猪只大量死亡，给养猪业造成巨大的经济损失，还可以通过与感染猪、带菌猪肉直接接触而传染给人，导致人永久性听力丧失、败血症型休克甚至死亡，严重威胁着人类的身体健康和生命安全，已引起社会的高度关注。1998年在江苏南通S.suis造成病死猪10万余头，人群感染25例；2005年四川省S.suis造成死亡猪几千头，人群感染208例。同期广东、香港也有病例报导。猪链球菌病已成为泰国的重要传染病，猪链球菌也是香港引起脑膜脑炎的第三大病原(仅次于肺炎链球菌和结核分枝杆菌)和越南引起脑膜脑炎的第一大病原(Streptococcus suismeningitis:the newest serious infectious disease.J Med Assoc Thai.2008；91(5):654-658；Streptococcus suis infection and risk factors for mortality.JInfect.2008；57(5):392-396；Streptococcus suis:an emerging human threat.JInfect Dis.2009；199(1):4-6.)。尽管该病原在我国引起两次爆发事件，并且近年来连续报导人和猪感染猪链球菌病例，目前仍未有商业化的方法区分猪链球菌的爆发菌株和散发菌株。因此，亟需寻找可用于能够区分爆发菌株和散发菌株的检测靶点，并建立相应的检测方法，使得我们能够对该病原进行监测，防患于未然；也有助于在中国突发公共卫生事件中早期应急处置疫情，进而抑制疫情的爆发和蔓延。

目前猪链球菌的检测方法主要有微生物学方法、生化方法、免疫学方法和分子生物学方法等。微生物学方法和生化方法并不能用于区分不同菌株的致病性，更无法区分爆发菌株和散发菌株。免疫学方法只可用于检测部分公认的毒力因子，并且需要制备毒力因子相应的抗血清，对操作人员要求较高，这些要求一定程度上限制了该方法的应用。近年来分子生物学的检测方法的发展较大程度上提高了病原检测的特异性和灵敏度，减少了检测时间，已经成为重要的检测技术。目前常见的分子生物学检测方法如特异性的核酸探针，荧光实时定量PCR和PCR检测方法等。尽管不同的分子生物学检测方法各有利弊，共同需要解决的问题是检测靶点的选择。