[发明专利]利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基和培养方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基和培养方法。

背景技术

乙基多杀菌素是从放线菌刺糖多孢菌发酵产生的，主要用于防治鳞翅目害虫（小菜蛾、甜菜夜蛾）及缨翅目害虫（蓟马）。乙基多杀菌素不仅具有多杀霉素防治害虫的一切功能，而且对多杀霉素在防治水果和坚果等农作物害虫无显著效果时，却能够发挥极好的效果。使用乙基多杀菌素比目前市场上所用的杀虫剂用量更低，在环境中的滞留时间比老品种的杀虫剂更短； 这种优异的环境特性， 将会给它带来一个新的市场，是对多杀霉素产品销售市场极为重要的补充。

目前，由于技术保密等原因，国外对于乙基多杀菌素发酵相关研究报道较少，而国内对乙基多杀茵素发酵研究处于起步阶段，其存在的主要问题有以下几点：

1 国内缺少关于规模化大生产乙基多杀菌素的发酵工艺文献报道，不能够为大生产模式提供有效地技术支持。

2 工业化大生产发酵水平较低，其发酵水平维持在1-2g/L左右，导致产品在国际市场中竞争力较弱。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种可有效提高发酵单位，降低能耗，缩短发酵周期，同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现乙基多杀菌素稳定、高效生产的利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基。

本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产乙基多杀菌素的培养方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基，其特征在于包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其中

所述一级种子培养基的组成为：

淀粉糖蜜5～9g/L、麸皮8～12g/L、橄榄油2～6g/L、鱼粉3～7g/L、玉米浆干粉11～15g/L、中性大豆蛋白胨4～8g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；

所述二级种子培养基的组成为：

淀粉糖蜜7～11g/L、麸皮11～15g/L、橄榄油3～7g/L、鱼粉5～9g/L、玉米浆干粉12～16g/L、中性大豆蛋白胨5～9g/L、缩二脲0.2～0.6g/L、轻质碳酸钙2～6g/L、磷酸二氢钾0.03～0.07g/L；

所述发酵培养基的组成为：

淀粉糖蜜10～14g/L、麸皮13～17g/L、橄榄油4～8g/L、鱼粉7～11g/L、玉米浆干粉14～18g/L、中性大豆蛋白胨7～11g/L、缩二脲0.3～0.7g/L、复合氨基酸粉0.4～0.8g/L、轻质碳酸钙2～6g/L、磷酸二氢钾0.03～0.07g/L、硫酸镁0.03～0.07g/L、硫酸亚铁0.002～0.006g/L、生物素0.004～0.008g/L、卵磷脂0.02～0.06g/L、乙基纤维素5～9g/L。

一种利用权利要求1所述培养基发酵生产乙基多杀菌素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为：

1） 一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌并冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的刺糖多孢菌母瓶发酵液接入一级种子培养基中进行一级种子培养，至菌体浓度28～32%、培养时间50～54h时移种；

2）二级种子培养：首先将二级种子培养基灭菌并冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，将已经培养好的一级种子培养基移入二级种子培养基中进行二级种子培养，至菌体浓度35～39%、培养时间45～50h时移入发酵培养基；

3）发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子液移入发酵培养基进行发酵培养，至菌体浓度34～38%、发酵周期不超过170h，菌株产量＞3g/L时终止发酵。

所述一级种子培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮20～30mg/L、还原糖2～3g/100ml；

所述二级种子培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮30～40mg/L、还原糖3～4g/100ml；

所述发酵培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮40～60mg/L、还原糖4～6g/100ml。

所述培养好的刺糖多孢菌母瓶发酵液质量要求为：菌体浓度20～30%；镜检无杂菌。

所述一级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：30～50m³/h；搅拌转速60～80r/min。